MIO temeljna podloga, priprema i uporaba



pola MIO je biokemijski test koji se koristi za identifikaciju vrsta bakterija koje pripadaju obitelji Enterobacteriaceae. Vrlo je hranjiv i sastoji se od glukoze, ekstrakta kvasca, peptona, L-ornitin hidroklorida, bromokrezola i agara.

Značenje akronima (MIO) opisuje svaki od parametara koji se mogu promatrati u ovom mediju; motilitet, indol i ornitin. Motilitet je sposobnost mikroorganizma da se kreće uz prisutnost flagelice. Da bi se ovo svojstvo moglo promatrati, konzistencija medija mora biti polučvrsta, tako da pripravak ima manju količinu agara..

Proizvodnja indola dokazuje prisutnost enzima triptofanaze koji djeluje na aminokiselinu triptofan, budući da je nužna upotreba reagensa za otkrivanje koji čini proizvodnju indola vidljivom..

Konačno, ornitin određuje je li bakterija sposobna dekarboksilirati aminokiselinu, tj. Ako ima enzim orinitin dekarboksilazu.

indeks

  • 1 Temelj
    • 1.1 Pepton, ekstrakt kvasca i triptin
    • 1.2 Motilitet
    • 1.3 Glukoza
    • 1,4 L-Ornitin
    • 1,5 pH indikator
  • 2 Tehnika sjetve i razvoja
  • 3 Priprema
    • 3.1 MIO Srednji
    • 3.2 Kovacsov reagens (razvijen od strane Indolovog testa)
  • 4 Upotrijebite
  • 5 Kontrola kvalitete
  • 6 Reference

temelj

Pepton, ekstrakt kvasca i triptin

Ovi elementi doprinose hranjivoj snazi ​​ovog medija. Oni služe kao izvor hranjivih tvari i esencijalnih aminokiselina za razvoj bakterija.

Osim toga, triptein je izvor triptofana koji dokazuje prisutnost enzima triptofanaze, koji razgrađuje triptofan reduktivnom deaminacijom koja oslobađa indol, piruvičnu kiselinu, amonijak i energiju..

Indol je bezbojan, pa se njegova prisutnost otkriva dodavanjem pet kapi Ehrlich ili Kovacs reagensa, oboje s p-dimetilaminobenzaldehidom.

Aldehidna skupina ovog spoja reagira s indolom, stvarajući prstenastu fuchsia-crvenu tvar na površini agara..

Bilo koji trag boje treba smatrati pozitivnim dokazom. Test treba odmah pročitati, jer nakon nekog vremena boja se degradira.

S druge strane, ovaj test treba otkriti nakon što se zabilježe rezultati motiliteta i dekarboksilacije ornitina..

interpretacija

Pozitivni test: formiranje fuchsia crvenog prstena kada se dodaje Kovacs reagens kapi.

Negativni test: nema formiranja prstena.

motilitet

Sposobnost bakterija da se kreću dokazat će se ako se promatra mutni medij ili ako postoji debela linija rasta koja se širi oko početne inokulacije..

Test negativnog motiliteta dokazat će se promatranjem tanke linije rasta, a svugdje će biti bez rasta.

Važno je da se motilitet pročita prije otkrivanja indola, budući da dodavanje reagensa zamagljuje cijeli medij.

U mobilnim, ali sporo rastućim bakterijama teško je pokazati njihovu pokretljivost s ovim medijem. U tom se slučaju preporučuje korištenje drugih testova ili metoda, kao što je medij pokretljivosti ili metoda kapanja kapljice.

glukoza

Glukoza je ugljikohidrat koji se može fermentirati i koji osim što osigurava energiju zakiseljava medij, nužan je uvjet za dekarboksilaciju aminokiseline ornitina.

Fermentacija glukoze treba uvijek nastupiti na temelju načela da sve bakterije iz obitelji Enterobacteriaceae fermentiraju glukozu.

L-omitin

Ako bakterija proizvodi enzim ornitin dekarboksilazu, može djelovati nakon što se medijum zakiseli fermentacijom glukoze.

Enzim ornitin dekarboksilaza djeluje na karboksilnu skupinu aminokiseline koja proizvodi amin zvan putresin koji ponovno alkalizira medij.

Ovaj test treba pročitati nakon 24 sata inkubacije, jer ako pokušate pročitati prije nego što možete pogrešno protumačiti test s lažnim negativnim rezultatom.

Mora se imati na umu da je prva reakcija koja se javlja fermentacija glukoze, tako da medij postaje žut u početnoj fazi (prvih 10 do 12 sati). Ako se nakon toga dogodi dekarboksilacija ornitina, medij će postati ljubičast.

Važno je interpretirati ornitinski dekarboksilacijski test prije otkrivanja indola, budući da dodavanje Kovacs reagensa modificira boju medija.

interpretacija

Negativni test: srednje žute ili žute pozadine.

Pozitivni test: potpuno ljubičasta.

PH indikator

U ovom slučaju koristi se bromokrezol ljubičasta; osobu zaduženu za otkrivanje kada je pH promjena u sredini. Kada se zakiseli, indikator postaje žut, a kada je alkaliziran postaje ljubičast.

Sjeme i tehnika razvoja

Da bi se posadio MIO medij, upotrebljava se ravna petlja ili igla, a uz nju se prikuplja dio kolonije koju treba proučavati..

U MIO mediju se vrši ravna pukotina. Nije preporučljivo izvesti dvostruku punkciju, jer može dati pogrešnu sliku pokretljivosti ako se punkcije ne izvode na istom mjestu.

Inkubirajte tijekom 24 do 48 sati na 37 ° C u aerobiozi. Promatrajte rezultate u ovom redoslijedu: pokretljivost, dekarboksilaciju ornitina i konačno otkrijte indol.

Preporučljivo je aseptično uzeti 2 ml medija, prebaciti ga u sterilnu epruvetu i tamo provesti indolni test, tako da ako je negativan, ostatak originalne epruvete može biti inkubiran 24 sata, kako bi se ponovno otkrio indol..

Razvoj indola provodi se na slijedeći način: 3 do 5 kapi Kovacs reagensa se doda u MIO medij i snažno miješa. Promatra se ako se pojavi crveni prsten fuksije ili ne.

priprema

Pola MIO

Izvaže se 31 g MIO medija i otopi u jednoj litri destilirane vode.

Zagrijte dok mješavina ne prokuha jednu minutu, često miješajući dok se agar potpuno ne otopi. Podijelite 4 ml medija u 13/100 epruvete s pamučnim poklopcem.

Sterilizirajte u autoklavu na 121 ° C 15 minuta. Izvadite iz autoklava i ostavite da stoji ravno u stalku, tako da se formira polukruti blok.

Čuvati u hladnjaku 2-8 ° C. Dopustite da se učvrsti prije sadnje bakterijskog soja.

Boja dehidriranog medija je bež, a boja medijuma pripremljena blago ljubičasta.

Konačni pH pripremljenog medija je 6,5 ± 0,2

Medij postaje žut s kiselim pH i ljubičast je na alkalnom pH.

Kovacsov reagens (razvijen od strane Indolovog testa)

Ovaj reagens se priprema kako slijedi:

Mjeri se 150 ml amila, izoamila ili butil alkohola (bilo kojeg od tri). U njemu je otopljeno 10 g p-dimetilaminobenzaldehida. Zatim se polako doda 50 ml koncentrirane klorovodične kiseline.

Pripremljeni reagens je bezbojan ili svijetlo žut. Čuvati u jantarnoj boci i čuvati u hladnjaku. Tamno smeđa boja pokazuje njezino propadanje.

Također, Kovacsov reagens može se zamijeniti Ehrlichovim reagensom. Potonji, koji je osjetljiviji, preferira se da otkrije indol u bakterijama koje ga proizvode u minimalnim količinama, kao u nekim Gram negativnim ne-fermentirajućim bacilima i nekim anaerobima.

upotreba

Ovaj medij je test koji nadopunjuje niz biokemijskih testova za identifikaciju bakterija iz obitelji Enterobacteriaceae.

Podaci o dekarboksilaciji ornitina služe za diferencijaciju Shigella sonnei, što daje pozitivno, od Shigella boydii, Shigella flexneri i S. dysenterieae, koji daju negativne.

Ona također razlikuje rod Klebsiella, koji daje negativan, rodu Enterobacter, gdje je većina njegovih vrsta pozitivna.

Kontrola kvalitete

Svaki put kada se pripremi serija MIO medija, može se provesti kontrolni test. Za to se koriste poznati ili certificirani sojevi za promatranje ponašanja medija.

Sojevi koji se mogu koristiti su Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes i Proteus mirabilis.

Očekivani rezultati su E. coli i M. morganii. Dan M: +, I: + i O: +.

Klebsiella pneumoniae daje sve negativne (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis i Enterobacter aerogenes dan M: + I: - i O: +.

reference

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokemijski testovi za identifikaciju bakterija od kliničkog značaja. 3. izd. Uvodnik Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka dijagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. 5. izd. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.
  4. Laboratories Britania. MIO Medio 2015. Dostupno na: britanialab.com
  5. BD Laboratories BBL motilitet indol ornitin (MIO) srednji. 2007. Dostupno na: bd.com
  6. Valtek laboratoriji Medium M.I.O. Motilitet, indol, ornitin. 2010. Dostupno na: andinamedica.com