Pola SIM osnivanje, priprema i uporaba



pola SIM-a To je polukruti i diferencijalni agar, posebno dizajniran za identifikaciju nekih bakterija, uglavnom iz obitelji Enterobacteriaceae. Sastoji se od tripteina, peptona, željeznog sulfata, amonij sulfata, natrijevog tiosulfata i agara.

Ovaj medij omogućuje izvođenje triju važnih testova: proizvodnje sumporovodika (H2S), formiranje i pokretljivost indola, stoga je akronim SIM. Zbog velike korisnosti ne može nedostajati u bakteriološkom laboratoriju.

Za razliku od drugih medija, ovo mora biti polukruto, tako da se može uočiti kapacitet kretanja nekih bakterija. U tom smislu, ovaj test radi jako dobro za Enterobacteriaceae, ali ne i za Gram-negativne, ne-fermentirajuće bacile, gdje je poželjno koristiti druge metode, kao što je, na primjer, pad kapljica.

SIM medij omogućuje razlikovanje nekih specifičnih svojstava koja karakteriziraju neke bakterije u odnosu na druge. Na primjer Escherichia coli ona se razlikuje po tome što je H2S (-), indol (+) i pokretljivost (+), dok Proteus mirabilis to je H2S (+), indol (-), pokretljivost (+).

indeks

  • 1 Temelj
    • 1.1 Izvor napajanja
    • 1.2 Proizvodnja vodikovog sulfida
    • 1.3 Formiranje indola
    • 1.4 Motilitet
  • 2 Priprema
    • 2.1 Pola SIM-a
    • 2.2 Kovačev reagens
    • 2.3 Erlich reagens
  • 3 Upotreba
    • 3.1 Razmnoženo
  • 4 Kontrola kvalitete
  • 5 Ograničenja
  • 6 Reference

temelj

To je medij kulture koji se smatra diferencijalnim, jer njegova uporaba uspijeva razlikovati mikroorganizme koji mogu proizvesti sumporovodik od onih koji to ne čine; također ističe one koji formiraju indol iz triptofana onih koji ga ne oblikuju, i konačno diferencira pokretljivost od nepokretnih bakterija.

Izvor napajanja

Kao i svaki medij kulture, ima elemente koji osiguravaju potrebne hranjive tvari tako da se mogu razviti nezahtjevni mikroorganizmi. Ovi elementi su predstavljeni peptonima i triptinom.

Razvoj mikroorganizma u okolišu je neophodan da bi se moglo uočiti prisutnost ili odsutnost karakteristika koje se procjenjuju ovim medijem.

Proizvodnja sumporovodika

Slovo S akronima SIM odnosi se na proizvodnju sumporovodika (H2S). Bakterije koje mogu tvoriti sumporovodik će uzeti sumpor natrij tiosulfata.

Jednom kada se formira H2S - bezbojni plinovi - reagiraju s prisutnom solju željeza u mediju, formirajući željezni sulfid, jasno vidljiv (crni talog). Bakterije koje ne tvore H2S, ostavite sredinu izvorne boje (bež).

Prisutnost crnog taloga može spriječiti tumačenje motiliteta. Međutim, poznato je da većina enterobakterija koje proizvode H2S su pozitivni pokretljivost, kao što su Salmonella, Proteus i Citrobacter. Osim toga, crni talog koji pokriva gotovo cijeli medij ukazuje na pozitivan pokretljivost.

Osposobljavanje za indole

Drugo slovo akronima SIM je "I", što predstavlja formiranje indola.

U tom smislu, tripteína, osim što je izvor hranjivih tvari, ispunjava još jednu temeljnu funkciju. Ovaj pepton je bogat aminokiselinom zvanom triptofan, stoga može pokazati bakterije koje proizvode triptofanazu.

Ovaj enzim je odgovoran za rezanje aminokiseline triptofana, uz posljedično stvaranje indola (bezbojne tvari), piruvične kiseline i amonijaka..

Zbog toga je za demonstraciju ove reakcije potrebno dodati tvar koja otkriva (Ehrlich reagens ili Kovac reagens). Bilo koja od njih reagira s indolom, tvoreći prstenasto-crvenu fuksiju na površini agara. Ako se pojavi fuksijin prsten, indolni test se tumači kao pozitivan.

Bakterije koje nemaju taj enzim neće formirati prsten i interpretirati ga kao negativni indolski test.

Važno je naglasiti da bi se indolski test trebao posljednje protumačiti, jer kada se reagens doda, medij postaje zamagljen što otežava vizualizaciju motiliteta..

motilitet

Konačno, slovo "M" riječi SIM znači pokretljivost. Kako bi se mogla procijeniti pokretljivost, ovaj medij je strateški polukruti, jer je ova karakteristika bitna za promatranje da li postoji ili ne postoji bakterijsko kretanje. Bakterije koje imaju flagele su one koje daju ovaj pozitivan test.

Pozitivan test će biti vidljiv kada se promatra mutnoća, kako u početnom inokulumu, tako i oko njega. Dok se nemobilne bakterije razvijaju samo u početnoj putanji inokuluma.

priprema

Pola SIM-a

Izvaže se 30 g dehidriranog medija i otopi u jednoj litri destilirane vode. Smjesa se ostavi stajati 5 minuta i zatim zagrijava do ključanja, često miješajući dok se potpuno ne otopi..

Smjesu se stavi u epruvete s pamučnim poklopcem i 15 minuta u autoklavu na 121 ° C. Uklonite stalak za cijevi iz autoklava i ostavite ga da se stvrdne u uspravnom položaju, tako da je medij u obliku bloka..

Za skladištenje čuva se u hladnjaku dok se ne koristi. Pripremljeni medij mora imati konačni pH 7,3 ± 0,2.

U trenutku inokulacije medija mora biti na sobnoj temperaturi. Boja medija je bež.

Kovačev reagens

Izmjerite 150 ml amila ili izoamila ili butil alkohola. (Koristite jedan od tri navedena).

Otopiti 10 g p-dimetilaminobenzaldehida. Zatim polako dodajte 50 ml koncentrirane klorovodične kiseline.

Reagens spreman za uporabu je bezbojan ili svijetlo žut. Treba ga čuvati u jantarnoj boci i pohraniti u hladnjak. Nemojte koristiti ako je tamno smeđe boje; koji označava da je oštećen. Ovaj reagens je poželjan kada se radi o enterobakterijama.

Erlich reagens

Izvaže se 2 g p-dimetilaminobenzaldehida i otopi se u 190 ml apsolutnog etilnog alkohola i polako se promiješa s 40 ml koncentrirane klorovodične kiseline. Držite Kovačev reagens na isti način. Ehrlich reagens se više koristi za ne-fermentirajuće i anaerobne bakterije.

aplikacije

SIM medij se visoko koristi u laboratorijima za bakteriologiju. Prednost je u tome što se u istoj cijevi mogu uočiti tri bitne značajke u identifikaciji enterobakterija.

zasađen

Ispravan način sijanja ovog medija je upotrebom igle kojom se uzima dio čiste kolonije za proučavanje i umeće se u središte medija vertikalno. Mora se napraviti jedan potisak. Puknuće ne bi trebalo doseći dno cijevi, ispravna stvar je pokriti samo dvije trećine dubine.

Ne preporučuje se ponavljanje inokuluma, jer to može dovesti do pogrešnih tumačenja pozitivnog motiliteta. Inokulirani medij je inkubiran u aerobiozi na 37 ° C tijekom 24 sata.

Zaključili ste vrijeme kada je promatrana proizvodnja H ili ne2S i motilitet se čita. Na kraju se otkriva indol, dodajući 3 do 4 kapi Ehrlich ili Kovac reagensa, lagano se miješa i interpretira.

Kontrola kvalitete

Kao kontrola sterilnosti, jedna ili dvije epruvete su inkubirane bez inokulacije u pećnici na 37 ° C tijekom 24 sata. Očekuje se da nakon tog vremena neće doći do rasta ili promjene boje.

Kao kontrola kvalitete mogu se koristiti certificirani poznati sojevi, kao što su: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Očekivani rezultati su: Escherichia coli H2S negativan, indol i pozitivan motilitet, Enterobacter aerogenes samo pozitivan motilitet, Salmonella typhimurium H2S i pozitivan pokretljivost, s negativnim indolom. Proteus vulgaris sve pozitivno, dok Klebsiella pneumoniae i Shigella sonnei sve negativno.

ograničenja

-Neki sojevi Morganella morganii, među ostalim sojevima može se proizvesti smeđi pigment u ovom mediju zbog proizvodnje melanina, a to ne treba miješati s precipitatom željezovog sulfida. Kod neiskusnih stručnjaka ova situacija može generirati lažne pozitivne rezultate u tumačenju H testa2S.

-Stroge aerobne bakterije rastu samo na površini cijevi, što otežava tumačenje pokretljivosti.

reference

  1. BD Laboratories BBL SIM Medij. 2008. Dostupno na: bd.com
  2. Neogen Laboratories SIM Medium. Dostupno na: foodsafety
  3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM Medium. 2009. Dostupno na: http://f-soria.es
  4. Laboratorij Brizuela-Lab SIM Medium. Dostupno na: .brizuela-lab.com
  5. Laboratories Britania. SIM Medium. 2015. Dostupno na: studyres.es/doc
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. 5. izd. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.