Priprema medija kulture od čega se sastoji, ciljevi i koraci



priprema medija za kulturu To je rutinska metodologija koja se koristi u laboratorijima za rast željenih mikroorganizama. Mediji za kulturu su kruti, tekući ili polukruti pripravci koji posjeduju sve hranjive tvari potrebne za razvoj mikrobne populacije.

Općenito, sredstva za rast mikroorganizama su bogata proteinima i aminokiselinama i obično sadrže neku komponentu koja pogoduje rastu organizma koji želite proučavati, kao što su vitamini, krv, serum, među ostalima..

Ne postoji opći ili univerzalni medij za kulturu, budući da njegov sastav varira prema potrebama mikroorganizma od interesa. Neke se bakterije mogu razviti u bilo kojem mediju kulture, ali druge imaju posebne zahtjeve.

indeks

  • 1 Od čega se sastoji??
    • 1.1 Agar
    • 1.2 Tekućine
    • 1.3 Izvadci
    • 1.4 Peptoni
    • 1.5 Amortizeri
  • 2 Ciljevi
  • 3 Vrste medija
    • 3.1 Na temelju svog sastava
    • 3.2 Na temelju vrste mikroorganizma
  • 4 koraka
  • 5 Reference

Od čega se sastoji??

Mikroorganizmi, kao što su gljivice i bakterije, ne mogu se proučavati pojedinačno zbog njihove male veličine. Stoga se moraju uzgajati na umjetne načine koji omogućuju značajno povećanje populacije.

Na primjer, ako želimo proučavati bakterije, moramo im pružiti prave uvjete kako bi se mogli razmnožavati i formirati koloniju (koja se može promatrati golim okom)..

Priprema medija za kulturu znatno varira ovisno o tipu mikroorganizma koji se želi kultivirati. Prije pripreme potrebno je znati osnovne prehrambene potrebe tijela.

Nadalje, opisat će se najčešći sastavni dijelovi koji se koriste u medijima kulture kako bi imali opću ideju o njihovoj pripremi:

agar

Koristi se u usjevima kao gelirajuće sredstvo i dodaje se kada se traži kruti ili polukruti medij. Prvo sredstvo za učvršćivanje upotrijebljeno u pripremi medija je želatina, ali 1883. godine agar je u svijet bakteriologije uveo W. Hesse..

Bakteriološki agar ima kao svoju glavnu komponentu polisaharid složenih grana ekstrahiranih iz algi. Ovaj se spoj koristi kao sredstvo za zgušnjavanje za uobičajene namirnice kao što su sladoled i džemovi.

To je vrlo vrijedan element u mikrobiologiji iz nekoliko razloga. Uglavnom zato što se mikroorganizmi ne mogu razgraditi, rastopiti na temperaturi od 100 ° C i ostati u tekućem stanju sve do 45 ° C ili manje..

U slučaju da želite pripremiti čvrsti medij, koncentracija agara trebala bi biti oko 1,5%, dok bi polu-krutina trebala biti pripremljena od 0,3 do 0,5%..

tekućine

Uzgoj patogenih organizama zahtijeva tjelesne tekućine tako da se mogu razvijati onako kako bi to činili u svom prirodnom okruženju. Zbog toga se dodaje cijela ili defibrilirana krv. Tekućina se ekstrahira iz zdrave životinje i nakon sterilizacije doda se u medij kulture.

izvadci

Dobiveni su iz različitih životinjskih dijelova (kao što su meso ili jetra) ili povrća (sjemenki) i prerađeni da bi se dobio kruti koncentrat u obliku paste ili praha. Najčešći su kvasac, slad i meso.

Peptonas

Ovi organski spojevi se dobivaju enzimskom ili kemijskom hidrolizom životinjskih ili biljnih tkiva. Svrha je dodati sadržaj bogat aminokiselinama, koje su temeljne jedinice proteina.

Amortizeri

Puferi ili puferski sustavi izbjegavaju iznenadne promjene pH vrijednosti i pomažu u održavanju optimalnog raspona koji tijelo tolerira.

Većina organizama može se pravilno razviti na pH 7, iako neke bakterije preferiraju alkalne medije. Međutim, postoje bakterije koje su otporne na varijacije pH između vrijednosti 6 i 9.

Kod vrsta osjetljivih na pH, oštećenje se ne proizvodi prekomjernom količinom vodika ili hidroksilnih iona, već povećanjem slabih kiselina ili baza koje mogu prodrijeti u stanicu.

Također, dodaju se indikatori da se pH prati i izbjegavaju odstupanja uzrokovana fermentacijom ili drugim procesima.

ciljevi

Glavni cilj pri pripremi medija za kulturu je dodati sve potrebne komponente kako bi se omogućio uspješan razvoj organizma koji želi biti izoliran. Kako bi se postigao željeni medij, mora se identificirati najučinkovitija kombinacija sastojaka i hranjivih tvari.

I priprema i skladištenje medija su kritični za osiguranje uspješnog rasta, budući da ovi koraci ovise o sastavu okoliša i dostupnosti hranjivih tvari.

Mora se uzeti u obzir da je uzgoj mikroorganizama zadatak na koji utječe nekoliko čimbenika koji su vanjski prema mediju kulture, kao što je intenzitet primljenog svjetla, temperatura i razina kiselosti ili alkalnosti medija. Stoga se svaka od tih varijabli mora uzeti u obzir.

Vrste medija

Na temelju svog sastava

Na temelju svog sastava postoje tri glavne vrste usjeva: prirodni ili empirijski, polusintetički i definirana sintetička ili kemijska sredstva.

Prirodni okoliš

U prirodnom okruženju točan sastav je nepoznat. One uključuju sastojke kao što su mlijeko, razrijeđena krv, sokovi od povrća, ekstrakti i infuzije mesa i peptona. Iz ekonomskih razloga često se dodaju jeftini dijelovi kao što su ekstrakt soje, sirutka, melasa itd..

Polusintetički mediji

To se naziva polusintetički medij ako je njegov sastav djelomično poznat. Bilo koji medij koji sadrži agar postaje polusintetički medij.

Među njima imamo i papa dekstrozni agar, czapek-dox agar, zobeni agar, peptonski mesni agar, među ostalim primjerima..

Sintetički ili kemijski određen medij

U tom je slučaju sastav medija - u smislu količine ugljika, dušika, sumpora, fosfora i drugih izvora faktora rasta - potpuno poznat. To je vrlo korisno ako želite dobiti ponovljive rezultate za druge istraživače.

Za takozvane "mikroorganizme s posebnim zahtjevima rasta" potrebno je dodati potrebne komponente. Primjer ove vrste su Lactobacillus.

Na temelju vrste mikroorganizma

Slično tome, postoji još jedna klasifikacija medija kulture na temelju tipa mikroorganizma koji može rasti u njemu. Slijedeći ovo načelo imamo sljedeća opća sredstva obogaćivanja, selektivne i diferencijalne. Svaki od njih je opisan u nastavku:

Opća sredstva

Oni priznaju razvoj velikog broja mikroorganizama. Ako bilo koji organizam treba posebne uvjete za svoj rast, neće se moći uspješno razvijati u ovoj vrsti usjeva.

Obogaćivanje znači

Sredstva za obogaćivanje pogoduju rastu određene vrste mikroorganizama, ali nije dodana nijedna tvar koja bi spriječila rast drugih vrsta mikroba u njemu..

Selektivni mediji

Oni traže specifičan rast mikroorganizma, nazivaju ga gljivice, bakterije, protozoe, među ostalima. Da bi to postigli, oni onemogućuju razvoj drugih.

Da bi se postigao ovaj cilj mogu se dodati smrtonosni kemijski spojevi za veliku skupinu mikroorganizama i bezopasni za organizam od interesa ili dodavanje izvora energije koji se mogu asimilirati traženim mikrobima..

Selektivni mediji koriste se za uzimanje medicinskih uzoraka kako bi se uzgojio patogeni mikroorganizam. Ovdje je potrebno pogodovati rastu patogena i inhibirati razvoj normalne mikrobne flore pacijenta.

Primjerice, bizmut sulfitni agar ne dopušta rast gram-pozitivnih bakterija i velikog broja bakterija koje se nalaze u gastrointestinalnoj šupljini. Stoga se koristi za uzgoj gram-negativnih bakterija koje uzrokuju tifus, Salmonella typhi u fekalnim uzorcima.

Diferencijalni mediji

Ovaj tip koristi neku dijagnostičku značajku organizma od interesa (posebnosti u njegovu metabolizmu, na primjer) kako bi ih mogao identificirati protiv druge vrste koja raste u istom okruženju..

I diferencijalni mediji i selektivni mediji vrlo su korisni u području kliničke mikrobiologije i javnog zdravlja, jer te discipline moraju otkriti prisutnost specifičnih mikroorganizama povezanih s lošim higijenskim uvjetima ili uvjetima..

Tvari za indikatore mogu se dodati kulturi koja daje karakterističnu karakteristiku željenoj koloniji. Na primjer, agar-eozin-metilensko plavo (skraćeno EMB) i MacConkey-agar dodani su s laktozom i pH indikatorom.

Prema tome, kada se kolonija razvije u tim medijima sa sposobnošću fermentacije laktoze i proizvodnje aldehida, može se promatrati u posebnoj boji.

koraci

Trenutno se medij kulture može kupiti u liofiliziranom obliku. Zbog toga je priprema olakšana i samo je proizvod rehidriran. Sadržaj mora biti odmjeren (uzimajući u obzir konačnu količinu koju želite pripremiti) i otopljen u destiliranoj vodi nakon svih indikacija proizvoda.

Sadržaj tekućeg medija mora se podijeliti u željene spremnike (Petrijeve posude, epruvete, itd.) Za naknadnu sterilizaciju. Za distribuciju krutog medija potrebno ga je rastopiti pomoću mikrovalova ili podvrgavanjem materijala vodenoj kupelji. PH medija mora se podesiti.

Obično se agar koristi u epruvetama ili u Petrijevim posudama. Ako se agar skrutne u nagnutom položaju, s odgovarajućim kutom, tako da je krajnji rub otvora dijagonalan, ovaj raspored je poznat kao vrh vrha ili nagnute cijevi. Kada se agar skrutne u potpuno vertikalnom položaju, naziva se "duboka".

Nakon sterilizacije medija - pomoću autoklava - dopušta se da se ohlade. Njima se mora rukovati u okolišu bez mikroorganizama, a najčešći je rad s upaljenim upaljačem koji osigurava aseptično okruženje u njegovoj blizini.

reference

  1. Celis, J. E. (2006). Biologija stanica: priručnik za laboratorije (Vol. 2). Elsevier.
  2. Finegold, S.M., Bailey, W.R., Baron, E.J., Fineglod, S.M., & Scott, E.G. (1991). Bailey Scott: mikrobiološka dijagnoza. Pan American Medical.
  3. Olivas, E. (2004). Priručnik prakse mikrobiologije I i II i parazitologija. Autonomno sveučilište Ciudad Juárez.
  4. Schlegel, H. G., i Zaborosch, C. (1993). Opća mikrobiologija. Cambridge University Press.
  5. Tortora, G.J., Funke, B.R. i Case, C.L. (2007). Uvod u mikrobiologiju. Ed Panamericana Medical.