Baird Parker Agar temelj, priprema i uporaba



Agar Baird Parker to je čvrsti, selektivni i diferencijalni medij kulture. Nastao je 1962. godine za otkrivanje i koagulazno pozitivno brojanje stafilokoka (Staphylococcus aureus).

Sastoji se od hidrolizata kazeina gušterače, ekstrakta mesa, ekstrakta kvasca, litij klorida, glicina, natrijevog piruvata, kalijevog telurita, emulzije agar i žumanjka jajeta..

Agar Baird Parker temelji se na sposobnosti S. aureus smanjenja telurita i proizvodnje lecitinaze. Oba svojstva stvaraju kolonije sa specifičnim karakteristikama za ovu vrstu. Stoga nudi veliku učinkovitost u otkrivanju ovog mikroorganizma.

Tipične kolonije S. aureus oni su crne ili tamno sive boje, bezbojne granice i jasnog haloa koji ih okružuje, odvajajući se od ostalih mikroorganizama. Ovaj se patogen može naći u kliničkim uzorcima, vodama, kozmetici i sirovim ili kuhanim namirnicama.

Njegova dijagnoza ili detekcija je vrlo važna, zbog raznolikosti patologija koje proizvodi, kao što su trovanje hranom, sindrom opelene kože, sindrom toksičnog šoka, apscesi, meningitis, septikemija, endokarditis, među ostalima..

indeks

  • 1 Temelj
    • 1.1
    • 1.2 Selektivno
    • 1.3 Diferencijalno
  • 2 Priprema
    • 2.1 Emulzija žumanjka jaja
    • 2.2 Kalijev telurit s 1% w / v
    • 2.3 Priprema medija za kulturu
  • 3 Upotrijebite
    • 3.1 Klinički uzorci
    • 3.2. Uzorci hrane
    • 3.3 Uzorci vode
  • 4 Kontrola kvalitete
  • 5 Preporuke
  • 6 Reference

temelj

Hranjiva moć

Hidrolizat kazein pankreasa, ekstrakt mesa i ekstrakt kvasca izvor su hranjivih tvari, vitamina i minerala potrebnih za opći razvoj mikroba, dok su piruvat i glicin spojevi koji pogoduju specifičnom rastu Staphylococcus aureus.

selektivan

Agar Baird Parker je selektivan jer sadrži tvari koje inhibiraju rast prateće flore, a istovremeno promoviraju razvoj S. aureus. Spojevi koji inhibiraju su litij klorid i kalijev telurit.

diferencijal

To znači da se može razlikovati S. aureus ostatak koagulaza negativnih stafilokoka. S. aureus ima sposobnost smanjiti telurit do crnog metalnog slobodnog teluruma, formirajući crne ili tamno sive kolonije.

Isto tako, žumanjak jajeta daje supstratima dokaz postojanja enzima lecitinaze i lipaze. S. aureus to je pozitivna lecitinaza i stoga će se oko kolonije promatrati jasan halo, što ukazuje da je lecitin hidroliziran.

U tom smislu, pojavljivanje u ovom agaru crnih ili tamno sivih kolonija svijetlih sa svijetlim aureolom oko toga ukazuje na prisutnost S. aureus. 

Ako se formira zona taloženja, indikativno je da postoji aktivnost lipaze. Neki sojevi S. aureus oni su pozitivna lipaza i drugi negativni.

U slučaju da S. aureus Ako je lipaza pozitivna, neprozirna zona će biti promatrana oko crne ili tamno sive kolonije, a zatim će biti očišćeni halo zbog djelovanja lecitinaze..

Kolonije bakterija koje nisu S. aureus mogu rasti u ovom mediju razvit će se bezbojne ili smeđe kolonije, bez okusa oko njih.

Atipične crne kolonije mogu se također promatrati sa ili bez bezbojne granice, ali bez jasnog haloa. Te se kolonije ne bi trebale uzeti u obzir, one ne odgovaraju S. aureus.

priprema

Emulzija žumanjka jaja

Uzmite svježe pileće jaje, dobro ga operite i stavite 2 do 3 sata u 70% alkohol. Zatim se jaje otvara aseptično i bjelanjak se pažljivo odvaja od žumanjka. Nakon toga se uzme 50 ml žumanjka i pomiješa s 50 ml sterilne fiziološke otopine.

Kalijev telurit s 1% w / v

Neke komercijalne kuće prodaju 1% kalijevog telurita spremnog za uporabu. Dodaje se mediju prije nego se medij skrutne.

Za pripremu ove otopine u laboratoriju izvagati 1,0 g kalijevog telurita i otopiti u dijelu vode. Nakon toga se količina vode dovrši do 100 ml. Otopina se mora sterilizirati metodom filtriranja.

Priprema medija kulture

Odviti 60 g dehidriranog medija i otopiti u 940 ml destilirane vode. Ostavite smjesu u mirovanju otprilike 5 do 10 minuta.

Primijenite toplinu miješajući medij često kako biste poboljšali proces otapanja. Neka prokuha minutu. Sterilizirajte u autoklavu na 121 ° C 15 minuta.

Pustite stajati dok ne dostigne temperaturu od 45 ° C i dodajte 50 ml emulzije žumanjka i 10 ml 1% telurita. Dobro promiješajte i poslužite 15 do 20 ml na sterilnim Petrijevim posudama.

Pustite da se stvrdne, naručite u plakete i pohranite u hladnjak do uporabe.

Konačni pH pripremljenog medija treba biti 6,8 ± 0,2.

Prije sadnje uzorka, pričekajte da ploča uzme temperaturu okoline. Pločice posijati na traku ili sijanjem na površinu s Drigalskom spatulom.

Boja dehidriranog medija je svijetlo smeđa, a boja pripremljenog medija je svijetlo jantar.

upotreba

Klinički uzorci

Klinički uzorci su posađeni izravno ispuštanjem dijela materijala na jedan kraj ploče, a odatle se iscrpljuje. Inkubirajte 24 do 48 sati na 35-37 ° C.

Uzorci hrane

Izvaže se 10 g uzorka hrane i homogenizira u 90 ml 0,1% peptonirane vode, od tamo se pripravljaju razrjeđenja, ako je potrebno. Inokulirajte ploče u triplikatu s 0,3 ml pripremljenih otopina i posijajte ih na površinu s Drigalskom špatulom. Inkubirajte 24 do 48 sati na 35-37 ° C.

Ova metodologija omogućuje brojanje tipičnih dobivenih kolonija i idealna je za prisutnost S. aureus iznad 10 CFU po g / ml uzorak.

Ako sumnjate da je iznos S. aureus mali je ili ima puno popratne flore, predlaže se da se uzorak obogati u triptikaza sojinoj juhi s 10% NaCl i 1% natrijevim piruvatom. To će pogodovati rastu S. aureus i spriječit će razvoj prateće flore. Cijevi koje su mutne će biti posijane na agar Baird Parker.

Uzorci vode

U vakuumskom filtracijskom sustavu i sterilizirano, 100 ml vode je filtrirano, a zatim je mikroporozna membrana od 0,4 mikrona uklonjena sterilnom stezaljkom i stavljena na Baird Parker ploču. Inkubirajte 24 do 48 sati na 35-37 ° C. Ova tehnika omogućuje brojanje tipičnih kolonija od S. aureus.

Kontrola kvalitete

Za procjenu kvalitete agar Baird Parker, mogu se koristiti poznati sojevi, kao što su Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 ili Proteus mirabilis ATCC 43071.

U slučaju sojeva S. aureus Poznato je da ATCC smanjuje telurit, a oni su pozitivna lipaza i lecitinaza. Stoga mora postojati zadovoljavajući razvoj i rasti konveksne kolonije s crnim središtem i bezbojnim rubom, s neprozirnim aureolom, a drugi halo više vanjskim.

S druge strane, S. epidermidis u ovom mediju se očekuje slab razvoj, sa sivkasto-smeđim do crnim kolonijama, bez jasnog aureola.

u E. coli i P. mirabilis očekuje se da će biti potpuno ili djelomično spriječena. U slučaju uzgoja, smeđe kolonije će se razviti bez neprozirne zone, niti jasnog haloa.

preporuke

-Medij se ne smije zagrijavati nakon dodavanja telurita i žumanjka.

-Priprema emulzije žumanjka jajeta i njegovo dodavanje u medij vrlo je ranjiv korak kontaminacije. Izuzetna pažnja mora biti poduzeta.

-Ako postoje prisutnost tipičnih kolonija u S. aureus mora biti potkrijepljena postavljanjem koagulaznog testa na navedeni soj.

-Ako postoje sumnjivi rezultati s koagulazom, moraju se postaviti druga potvrdna ispitivanja.

-Pazite da ne zbunite prisutnost tipičnih kolonija S. aureus s atipičnim kolonijama crne boje.

reference

  1. Doprinositelji Wikipedije. Baird-Parker agar. Wikipedija, slobodna enciklopedija. 15. ožujka 2017., 19:36 UTC. Dostupno na: wikipedia.org/ Pristupljeno 18. veljače 2019. godine.
  2. BD Laboratories. Agar Baird Parker. 2006. Dostupno na: bd.com
  3. Laboratories Britania. Baza agara Baird Parker. 2015. Dostupno na: britanialab.com
  4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Agar Baird Parker. Dostupno na: http://f-soria.es/Inform
  5. Laboratories Britania. Kalijev telurit. 2015. Dostupno na: britanialab.com
  6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Staphylococcus aureus enterotoksigeni tip A, u nazofaringealnom razmazu kod osoba koje rukuju hranom. Rev Med Čile 2017; 145: 1559-1564
  7. Venecuelanski standard Covenin 1292-89. (1989). Hrana. Izolacija i brojanje Staphylococcus aureus. Dostupno u:sencamer.gob.ve