Agar BHI temelj, priprema i uporaba



BHI agar ili agar Brain Heart Infusion je hranjivi kruti medij kulture. Na španjolskom ga nazivamo agar za infuziju mozga srca. To je neselektivni medij za kulturu, što znači da se mogu razviti sve vrste Gram-pozitivnih i Gram-negativnih bakterija, kao i neki kvasci i filamentozne gljive..

Sastoji se od teleće infuzije mozga i srca, peptičnog hidrolizata životinjskih tkiva, hidrolizata kazeina gušterače, natrijevog klorida, glukoze, dinatrij fosfata i agara..

Treba napomenuti da je BHI agar jedan od najčešćih medija za kulturu u bakteriološkim laboratorijima. Može se koristiti bez dodataka kao primarna kultura, subkultura kolonija dobivenih u drugim selektivnim medijima ili za održavanje sojeva u laboratoriju.

S druge strane, to je idealan medij koji se koristi kao baza u pripravi obogaćenih medija, kao što su krvni agar i čokoladni agar. Oba su idealna za izoliranje zahtjevnih mikroorganizama s prehrambene točke gledišta. Međutim, mora se uzeti u obzir da, budući da sadrži glukozu, nije primjereno promatrati obrasce hemolize.

Isto tako, BHI agar se može koristiti za pripremu specijalnih sredstava za izolaciju patogenih mikroorganizama teškog rasta u uobičajenim medijima, među njima: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae i Histoplasma capsulatum.

S dodatkom antibiotika BHI agar postaje selektivni medij za izolaciju gljivica.

indeks

  • 1 Temelj
  • 2 Priprema
    • 2.1
    • 2.2 Ploče
    • 2.3 Priprema krvnog agara
  • 3 Upotreba
    • 3.1 Koristite bez dodataka
    • 3.2 Kao bazni agar za pripravu drugih medija
  • 4 Kontrola kvalitete
  • 5 Reference

temelj

To je hranjivi kulturni medij za izoliranje umjereno zahtjevnih mikroorganizama, koji može povećati obogaćivanje dodatkom krvi i drugih prehrambenih dodataka.

To je neselektivni medij za kulturu, stoga omogućuje rast većine Gram pozitivnih i Gram negativnih bakterija, kao i nekih gljiva. Međutim, može postati selektivan s dodatkom antibiotika.

Medij sadrži infuziju telećeg mozga i srca, peptidni hidrolizat iz životinjskih tkiva i hidrolizat kazeina gušterače; svi ti spojevi djeluju kao izvori vitamina, aminokiselina, dušika i ugljika.

Glukoza je ugljikohidrat koji mikroorganizmima daje energiju nakon što je fermentira. Dok natrijev klorid i dinatrijev fosfat održavaju osmotsku ravnotežu i osiguravaju pH blizu neutralnosti. Konačno, agar daje čvrstu konzistenciju mediju.

priprema

Izvaže se 52 grama dehidriranog medija i otopi u jednoj litri destilirane vode. Dovedite smjesu na izvor topline dok ne prokuha, često miješajući tijekom procesa otapanja.

Možete pripremiti klinove ili ploče BHI agara bez aditiva.

podupirači

Za pripremu klinova pripremite se do punjenja pola svake epruvete, pokrijte i sterilizirajte u autoklavu na 121 ° C 15 minuta, kada izlažete da ležite na bazi dok se ne skrutne. Zatim pohranite u hladnjak do uporabe.

ploče

Otopljena smjesa je autoklavirana na 121 ° C tijekom 15 minuta, kada je ostavljena da se ohladi na 50 ° C i 20 ml medija je posluženo u sterilnim Petrijevim posudama. Dopušteno im je skrućivanje, preokretanje i čuvanje u hladnjaku dok se ne upotrijebe. Pustite da ploče prije sijanja u sobnoj temperaturi.

PH medija treba biti 7,4 ± 0,2.

Nepripremljeni medij je bež i pripremljen je svijetlo jantar.

Priprema krvnog agara

Nakon sterilizacije medija, ohladi se na temperaturu od približno 45 do 50 ° C, u to vrijeme dodajte krv (50 ml), lagano promiješajte kako biste homogenizirali i aseptično poslužili 20 ml u svakoj Petrijevoj posudi. Ako se na ploči formiraju mjehurići, plamen plamenika treba brzo preći preko mjehurića kako bi ih se uklonilo.

Isto tako, posebni mediji mogu se pripraviti dodavanjem odgovarajućih aditiva kada smjesa dosegne temperaturu od 45 do 50 ° C.

Medij je trešnja crvena.

aplikacije

Koristite bez dodataka

BHI agar bez aditiva je koristan kao primarna kultura i za sadnju čistih sojeva mikroorganizama koji su srednje ili umjereno zahtjevni za kasniju identifikaciju.

Budući da se radi o svijetlo obojenom mediju, idealan je za promatranje pigmenata, a također i zato što ne sadrži interferirajuće tvari, može se koristiti za izvođenje biokemijskih testova, kao što su oksidaza i katalaza, ili za postavljanje drugih biokemijskih testova iz kolonija koje potječu iz ovog područja. agar.

Isto tako, BHI klinovi za agar su široko korišteni za održavanje sojeva za određeno vrijeme u laboratoriju (bakterioteka).

Ploče ili klinovi zasađeni na površini s bakterijskim sojevima inkubirani su na 37 ° C tijekom 24 do 48 sati. Dok će u gljivama temperatura i vrijeme inkubacije ovisiti o tipu gljive koju tražite.

Kao bazični agar za pripravu drugih medija

S ovom bazom mogu se pripremiti obogaćeni i selektivni mediji.

obogaćen

Njegova glavna funkcija je služiti kao osnova u pripremi krvnog agara za rutinsku uporabu u mikrobiološkim laboratorijima. Posebno, baza BHI pogoduje izolaciji sojeva Streptococcus sp. Međutim, nedostatak mu je što nije prikladan za promatranje uzoraka hemolize jer sadrži glukozu.

Također se koristi u pripremi zečjeg ili konjskog agara za izolaciju Haemophilus sp. Za bolje rezultate možete dodati dodatak za obogaćivanje (IsoVitaleX).

Ako uzorci dolaze iz respiratornog trakta u agar, bacitracin se može dodati kako bi se inhibirala prateća flora i povećala vjerojatnost oporavka sojeva Haemophilus sp.

S druge strane, krvni agar (janjetina ili ljudski) može se pripraviti s telistinskim cistinom da bi se izolirao Corynebacterium diphtheriae. Isto tako, korisno je pripremiti agar zečje krvi, uz dodatak cistina i glukoze za izolaciju Francisella tularensis.

Zasejavanje ploča krvnog agara vrši se iscrpljenjem i inkubira na 35-37 ° C tijekom 24-48 sati u mikroaerofilnom (5-10% CO)2).

selektivan

Ovaj medij s dodatkom antibiotika može zamijeniti Sabouraud agar za izolaciju gljivica.

Kombinacija BHI agara s kloramfenikolom - gentamicinom ili penicilinom -, streptomicinom i konjskom krvlju idealna je za izolaciju Histoplasma capsulatum.

Ovisno o mikroorganizmu koji se izolira, preporučuje se inkubacija na 35-37 ° C ili na sobnoj temperaturi u aerobiozi. Ponekad je inkubacija potrebna u oba temperaturna raspona, koristeći 2 ploče za to.

Neke gljive vole Trichophyton mentagrophytes treba ih inkubirati na sobnoj temperaturi do 7 dana.

Kontrola kvalitete

Iz svake pripremljene šarže preporuča se inkubirati 1 ploču ili klin na 37 ° C 24 sata i provjeriti da nema rasta; Osobito je važno kada se priprema krvni agar, jer je to lako zagađeni medij.

S druge strane, kvaliteta medija može se procijeniti inokuliranjem poznatih ili certificiranih standardnih sojeva i promatranjem njihovog razvoja.

U tom smislu, za procjenu BHI agara bez aditiva, sojeva Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 ili Candida albicans ATCC 10231. Inkubiraju se na 37 ° C u aerobiozi 24 do 48 sati. U svim slučajevima očekuje se zadovoljavajući rast.

Za procjenu ploča krvnog agara, sojeva  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 ili Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

Bakterijski sojevi su inkubirani na 37 ° C u mikroaerofiliku tijekom 24 sata, dok je gljivica inkubirana na sobnoj temperaturi u vlažnoj komori do 7 dana. U svim slučajevima očekuje se zadovoljavajući rast.

reference

  1. Laboratories Britania. Agar za infuziju mozga srca. 2015. Dostupno na: britanialab.com.
  2. BD Laboratories Agar Brain Heart Infusion (BHI). 2013. Dostupno na: bd.com.
  3. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Agar za infuziju srčanog mozga. 2009.
  4. Neogen laboratorij. Agar za infuziju srčanog mozga. Dostupno na: foodsafety.neogen.com
  5. Gil M. Agar krv: temelj, uporaba i priprema. 2018. Dostupno na: lifeder.com.
  6. Doprinositelji Wikipedije. Infuzija mozga srca Wikipedija, slobodna enciklopedija. 19. rujna, 2018., 03:58 UTC. Dostupno na: wikipedia.org. Pristupljeno 2. ožujka 2019.
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka dijagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.