Temelj Cetrimida agara, priprema, uporaba



cetrimid agar ili cetrimid je selektivni kruti medij kulture, dizajniran za izolaciju Pseudomonas aeruginosa. Temelji se na naglašavanju proizvodnje pigmenata karakterističnih za ovu vrstu i razvijena je iz modifikacije Tech agara, koju su stvorili King, Ward i Raney.

Izvorna formula sadrži soli magnezijevog klorida, kalij sulfat, digestiju želatine pankreasa i agar-agar. Modifikacija formule sastojala se od dodavanja cetrimida (cetil trimetil amonij bromida) i glicerola.

Cetrimidni agar je koristan za mikrobiološka ispitivanja uzoraka na kojima je prisutna Pseudomonas aeruginosa. Valja napomenuti da je ova bakterija od velike važnosti, jer iako je dio normalne mikrobiote u okolišu, često se ponaša kao oportunistički patogen..

Stoga je jedan od najčešćih problema uzrokovanih ovom klicom bolničke infekcije, tj. One koje se događaju u bolničkom okruženju, napadaju pacijente koji imaju depresivan imunološki sustav..

S druge strane, zbog afiniteta koji ovaj mikroorganizam ima s vlagom, najranjivije mete su: pomoćna oprema za disanje, lijekovi, nebulizatori, izvori vode, klima uređaji, dezinficijensi, otopine sapuna, otopine za injekcije, otvorene rane , kateteri, urinarni kateteri, između ostalih.

U tom smislu, cetrimidni agar je koristan za provođenje mikrobioloških kontrola i usjeva prema prethodno navedenim elementima.

indeks

  • 1 Temelj
    • 1.1 Tumačenje
  • 2 Priprema
  • 3 Upotreba
  • 4 Razmnoženo
  • 5 Ograničenja
  • 6 Kontrola kvalitete
  • 7 Reference

temelj

Cetrimid agar se temelji na sposobnosti medija da potiče rast P. aeruginosa, stimuliraju proizvodnju njihovih pigmenata i zauzvrat inhibiraju rast drugih mikroorganizama.

Ta svojstva su posljedica funkcije koju svaka od njegovih komponenti ispunjava. Prisutni želatin pepton služi kao izvor dušika, vitamina i minerala. Glicerol ili glicerin djeluje kao izvor ugljika.

Cetrimid (cetil trimetil amonij bromid) je tvar koja inhibira rast drugih bakterija P. aeruginosa, uključujući i druge vrste koje pripadaju istom rodu.

Do inhibicije dolazi zato što cetramid djeluje kao kationski deterdžent, destabilizirajući plazmatsku membranu većine bakterija, s izuzetkom P. aeruginosa i neki drugi koji uspijevaju preživjeti.

S druge strane, sadrži magnezijev klorid i kalijev sulfat. Ovi spojevi stimuliraju fenotipsku ekspresiju povezanu s kapacitetom Pseudomonas aeruginosa proizvodnje različitih pigmenata, među njima: piocijanina, pioverdina, piorubina, piomelanina i fluoresceina. Konačno, sadrži agar-agar, koji mu daje čvrstu konzistenciju.

interpretacija

Tumačenje rasta dobivenog u ovom agaru napravljeno je na sljedeći način:

Promatranje okruglih, glatkih kolonija s pravilnim rubovima, koje proizvode plavo-zelene, zelene, smeđe ili crvenkaste pigmente, plus emisije voćnog mirisa (aminoacetofenon), pretpostavlja se kao rezultat prisutnosti ove bakterije u navedenom uzorku..

S druge strane, to je indikativno P. aeruginosa promatranje svijetle žućkasto-zelenog pigmenta na kolonijama kada je ploča izložena ultraljubičastom svjetlu.

Valja napomenuti da je svaka promatrana boja posljedica proizvodnje specifičnog pigmenta. Plavo-zeleni pigment odgovara proizvodnji piocijanina, zelene do pioverdina, crvenkaste do piorrubinske, smeđe do piomelaninske i svijetlo žućkasto-zelene fluorescencije pod ultraljubičastim svjetlom do fluoresceina.

priprema

Izvaže se 43 g dehidriranog medija i otopi u destiliranoj vodi. Dodati 10 ml glicerola. Odnesite smjesu u izvor topline. Pustiti da prokuha nekoliko minuta do potpunog otapanja.

Autoklavirajte na 121 ° C 15 minuta. Ostavite se i poslužite u sterilnim Petrijevim posudama kada je temperatura oko 50 ° C.

Pustite da se očvrsne, preokrene, naruči u plakete i pohrani u hladnjak do upotrebe. Da bi se zasadile ploče cetrimid agara, treba ih unaprijed izvaditi iz hladnjaka i pustiti da se smanji sobna temperatura..

Krajnji pH medija treba biti 7,2 ± 0,2.

Boja dehidriranog medija je bež, a preparat je neproziran bijeli.

aplikacije

Cetrimide agar se može koristiti za sadnju svih vrsta uzoraka u kojima je prisutan Pseudomonas aeruginosa. Stoga je korisna u svim područjima mikrobiologije (okolišna, industrijska, klinička, voda i hrana).

Od velike je važnosti analizirati bolničko okruženje i na taj način biti u mogućnosti primijeniti korektivne medijacije, jer ovaj mikroorganizam dolazi do pacijenata kroz opremu, lijekove, otopine i kontaminirane zalihe koje koristi pacijent..

Na taj način, mikroorganizam može zaraziti donji respiratorni trakt, urinarni trakt i rane imunosupresiranih pacijenata.

Brojevi kolonija se također mogu napraviti P. aeruginosa u mikrobnim graničnim testovima.

zasađen

Cetrimid agar se može koristiti kao primarna kultura. Ploča se inokulira u jedan od njezinih rubova, a odatle ispušta do ostatka ploče. Tekući uzorci mogu se sijati na površinu drigalskom lopaticom.

Ploče se inkubiraju u aerobiozi na 37 ° C tijekom 24 sata inkubacije.

ograničenja

-Mali postotak sojeva  Pseudomonas aeruginosa ne proizvode piocijanin, tako da možete interpretirati lažno negativan.

-Neke vrste Pseudomonas kliničke važnosti su inhibirane u ovom mediju.

-Unatoč promatranim karakteristikama opisanim za Pseudomonas aeruginosa, moraju biti potkrijepljeni dodatnim identifikacijskim testovima. Test koji ne treba propustiti je test oksidaze, trebao bi biti pozitivan.

-Neke enterobakterije mogu rasti u ovom mediju i razviti žuti pigment, ali se razlikuje od njega Pseudomonas aeruginosa pri čemu pri izlaganju ploče ultraljubičastom svjetlu nema fluorescencije.

-Serratia marcescens uspijeva razviti i proizvesti ružičasti pigment.

-Ako su plakovi zasijani s cetrimidnim agrom izloženi tijekom vremena na sobnoj temperaturi, sojevi P. aeruginosa mogu izgubiti fluorescenciju promatranu pod ultraljubičastim svjetlom, međutim, svojstvo se oporavlja ako se ponovno inkubira na 37 ° C.

Kontrola kvalitete

Za ispitivanje ispravnog djelovanja cetrimidnog agara mogu se koristiti kontrolni sojevi, kao što su: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 i Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Očekivani rezultati su:

  • u P. aeruginosa dobar rast, s plavo-zelenim pigmentom i pozitivnim fluoresceinom.
  • S. maltophilia i S. aureus će biti djelomično ili potpuno inhibirano.
  • To se očekuje Escherichia coli biti potpuno inhibiran.

reference

  1. Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Fenotipska i serološka karakterizacija kliničkih izolata iz Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
  2. Laboratoriji Conda Pronadisa. Cetrimidna baza agara. 2014. Dostupno na: condalab.com
  3. Laboratories Britania. Cetrimida agar. 2015. Dostupno na: britanialab.com
  4. BD Laboratories BD Pseudosel agar (Cetrimide agar). 2013. Dostupno na: bd.com
  5. Laboratorij Francisco Soria Melguizo, C.A. Cetrimid agar. 2009. Dostupno na: http://f-soria.es