Temelj čokolade na agaru, uporaba i priprema



čokoladni agar ona je kruta, obogaćena, neselektivna i ne-diferencijalna podloga za kulturu. Koristi se uglavnom za izolaciju mikroorganizama zahtjevnih s prehrambene točke gledišta, iako može rasti bilo koja vrsta bakterija.

Zbog toga se njegova korisnost povećava posebno kod sijanja uzoraka koji su normalno sterilni, kao što je CSF i zglobna tekućina. Iako je također uključena u način odabran za sjetvu polimikrobnih uzoraka, ali u tim slučajevima potrebno je dodati antibiotike koji inhibiraju popratnu floru.

Ovaj medij ima karakterističnu smeđu boju koja je vrlo slična čokoladi, pa odatle i njeno ime. Pripravak je vrlo sličan krvnom agaru, samo u tom slučaju krv mora biti zagrijana kako bi se crvene krvne stanice slomile.

Njegova priprema, poput krvnog agara, vrlo je osjetljiva, jer se lako kontaminira. Zbog toga mnogi laboratoriji radije stječu ovaj medij već pripremljen od komercijalnih kuća koje jamče njihovu kvalitetu.

indeks

  • 1 Temelj
  • 2 Upotreba
    • 2.1 Čokoladni agar pripravljen s Columbia agara
    • 2.2 Čokoladni agar pripremljen s GC baznim agrom (za gonokoke)
    • 2.3 Čokoladni agar pripremljen s Müeller Hinton agara
    • 2.4 Čokoladni agar pripravljen s Thayer Martin agar
  • 3 Priprema
    • 3.1 Izračuni
    • 3.2 Izvagati i otopiti
    • 3.3 Sterilizacija
    • 3.4 Agregacija krvi
    • 3.5 Drugi način pripreme čokoladnog agara bez upotrebe krvi
  • 4 Kontrola kvalitete
  • 5 Reference

temelj

Ovaj medij se sastoji od baze agara bogate hranjivim tvarima i zagrijane krvi. Hemoliza crvenih krvnih stanica daje faktor X (hemin) i faktor V (NAD), koji su potrebni za rast nekih mikroorganizama, kao što je rod. Haemophilus. Također je vrlo korisno za izolaciju Neisserias sp.

Kao i krvni agar, različiti mediji mogu se koristiti kao bazični agar ovisno o potrebi. Među korištenim medijima su infuzija mozga srca i triptikaza sojin agar, iako se najviše preporučuju agar Columbia, Müeller Hinton, GC agar i Thayer Martin agar..

Neke varijante čokoladnog agara uključuju komercijalno dostupan obogaćeni dodatak zvan Isovitalex ili Polivitex.

Ovi dodaci sadrže vitamin B12, L-glutamin, adenin, gvanin hidroklorid, p-aminobenzojeva kiselina, nikotinamid adenin dinukleotid (NAD), tiamin pirofosfat, željezov nitrat, tiamin hidroklorid, cistein hidroklorid, L-cistin i glukoza.

Važno je napomenuti da je čokoladni agar obogaćeniji od krvnog agara, ali ne dopušta promatranje uzoraka hemolize..

aplikacije

Čokoladni agar pripremljen s Columbia agara

Ovaj medij sadrži probavljeni kazein i srčani pankreas, probavljeni mesni peptid, natrijev klorid, agar, ekstrakt kvasca i kukuruzni škrob. Također je bogat vitaminima, mineralima i esencijalnim aminokiselinama.

Ova baza s zagrijanom krvlju idealna je za izolaciju bakterija roda Neisseria. S druge strane, ako se dodatku za Brucellu doda mediju, gore spomenuti mikroorganizam se može izolirati. Rezultati su poboljšani korištenjem konjske krvi.

Čokoladni agar pripremljen s GC baznim agrom (za gonokoke)

Ovaj medij sadrži peptone, kukuruzni škrob, monobazne i dibazične pufere, natrijev klorid i agar.

Većina komercijalno pripremljenih čokoladnih agar prezentacija dolazi s ovom bazom i ne sadrži zagrijanu krv, već sintetsku mješavinu hemina i kemijskog dodatka faktora rasta, vitamina, minerala, amino kiselina, faktora V i glukoze..

Čokoladni agar pripremljen s Müeller Hinton agara

Koristi se za provođenje antimikrobne osjetljivosti zahtjevnih mikroorganizama, kao što je Streptococcus pneumoniae pomoću 5% zagrijane krvne stanice.

Također služi za primarnu izolaciju Neisserias i Haemophilus, ali u posebnom slučaju izolacije Haemophilus poželjna je upotreba konjske krvi, jer je bogat izvor faktora X i V.

S druge strane, ako uzorak koji se sije, potječe iz nesterilnog područja, preporuča se dodavanje antibiotika kako bi se spriječila normalna flora tog područja..

Primjer za respiratorne uzorke kod kojih se sumnja na prisutnost bakterija iz roda Haemophilus Bacitracin se koristi za inhibiranje rasta Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus i Saprofitni Neisseria.

U slučaju uzoraka genitalnog kancra, gdje se sumnja Haemophilus ducreyi, Čokoladni agar pripremljen na sljedeći način uspješno je upotrijebljen: Müeller-Hinton agar s 5% konjske krvi čokolade, 1% obogaćenje Isovitalexom i 3 μg / ml vankomicina.

Čokoladni agar pripremljen s Thayer Martin agar

Ovaj medij je poseban za izolaciju Neisseria gonorrhoeae. Mora sadržavati antibiotike kako bi spriječila popratnu floru. Koristi se janjeća krv.

priprema

Treba vidjeti indikacije za pripremu baznog agara koji će se koristiti. Nalaze se na poleđini pakiranja dehidriranog medija. Oni obično opisuju koliko bi se trebali izvagati za pripremu jedne litre medija za kulturu.

U laboratoriju možete pripremiti potrebnu količinu, može biti više ili manje od jedne litre.

izračuni

Izrađeno je pravilo od tri da se izračuna koliko bi se trebalo vagati da bi se pripremio željeni volumen. primjer:

Ako je za 1 litru potrebno vagati 40 grama i laboratoriju je potrebno 800 ml, kaže se:

1000 ml -40 gr

800 ml - X

Formula će biti sljedeća:

X = 32 gr (količina za vaganje 800 ml).

Izvagati i otopiti

Nastavljamo vagati potrebnu količinu i staviti je u fiolu s vodom.

Zagrijte do umjerene topline i lagano promiješajte rotirajućim pokretima sve dok se dehidrirani medij ne otopi i ostavite da prokuha 1 minutu..

sterilizirati

Fiola se unese u autoklav kako bi se medij sterilizirao na 121 ° C tijekom 20 minuta.

Agregat krvi

Kada se ostavi u autoklavu, ostavi se da se odmara sve dok temperatura medija ne bude otprilike između 56 do 70 ° C da bi se stavila krv i miješala dok se medij ne pojavi smeđa.

Ako ćete dodati dodatke, ovo je vrijeme za to. Zatim promiješati i poslužiti 20 ml u svaku sterilnu Petrijevu posudu.

Cijeli se postupak mora izvesti u laminarnom poklopcu ili oko Bunsen plamenika.

Pustite stajati dok se ne stvrdne i drže u hladnjaku.

Drugi način pripreme čokoladnog agara bez upotrebe krvi

Osnovni medij je pripremljen kao što je gore opisano, komercijalno dobiveni dehidrirani hemoglobin je otopljen i steriliziran u autoklavu.

Obje otopine su ostavljene da se ohlade na 50 ° C, spojiti i dodati dodatak. Izmiješati u aseptičnim uvjetima i poslužiti u sterilnim Petrijevim posudama.

Kontrola kvalitete

Važno je da se krv stavi na naznačenu temperaturu, jer je to idealno za liziranje crvenih krvnih stanica i istovremeno održava faktor V koji je termosenzitivan..

Na površini agara ne smije biti mjehurića. Svaka serija od 100 ploča treba inkubirati jednu ili dvije ploče u peći na 37 ° C tijekom 24 sata kako bi se provjerila njegova sterilnost.

Za najbolje rezultate, čokoladni agar treba koristiti kratko nakon pripreme.

Kontrolne bakterijske sojeve treba uzeti u laboratoriju kako bi se procijenila učinkovitost svježe pripremljenog medija za rast glavnih zahtjevnih mikroorganizama od kliničkog značaja..

reference

  1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktična klinička mikrobiologija. Sveučilište u Cadizu, drugo izdanje. Služba za publikacije UCA.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka dijagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Uvodnik.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. (5. izd.). Argentina, Uredništvo Panamericana S.A..
  4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Mogućnost korištenja osnovnog kulturnog medija GC-Biocen Agara u laboratoriju za mikrobiologiju. Rev Cubana Med Trop,  2004; 56 (3): 237-238. Dostupno na: scielo.sld.
  5. Doprinositelji Wikipedije. Čokoladni agar. Wikipedija, slobodna enciklopedija. 17. prosinca, 2018, 19:54 UTC. Dostupno na: en.wikipedia.org.