Simmonsov citratni agar temelj, priprema i uporaba



Simmons citratni agar To je čvrsti medij koji se koristi kao biokemijski test za identifikaciju mikroorganizama, osobito gram-negativnih bacila. Izvorni medij stvorio je Koser 1923. godine.

Koser-ov citratni medij sastojao se od bujona koji je sadržavao natrijev fosfat, amonijev fosfat, monokalijev fosfat, magnezijev sulfat i natrijev citrat..

Kao što se može vidjeti, jedina ugljik izvor medija je citrat, a dušik je amonijev fosfat, izostavljajući proteina i ugljikohidrata za tim elementima, općenito prisutne u drugim medijima.

Stoga se bakterija inokulirana u tom mediju može reproducirati samo ako može uzeti citratni ugljik. Test je bio pozitivan ako je u mediju došlo do zamućenja, ali je imao nedostatak da se može pojaviti nespecifična zamućenost.

Taj je problem riješio Simmons dodajući agar i bromotimol plavu u Koser-ovu izvornu formulu. Iako je načelo isto, ono se različito tumači.

indeks

  • 1 Temelj
    • 1.1 Način sijanja
    • 1.2 Tumačenje
  • 2 Priprema
  • 3 Upotrijebite
  • 4 Završna razmatranja
    • 4.1 Inokulum
    • 4.2 Sjeme
    • 4.3 Intenzitet boje
  • 5 Reference

temelj

Neke bakterije imaju sposobnost preživljavanja u odsustvu fermentacije ili proizvodnje mliječne kiseline, potrebnih za dobivanje energije korištenjem drugih supstrata. U ovom testu jedini izvor ugljika je citrat.

Bakterije koje su sposobne preživjeti pod tim uvjetima brzo metaboliziraju citrat alternativom tradicionalnom putu, koristeći ciklus trikarboksilne kiseline ili citratni fermentacijski ciklus..

Citrat katabolizam bakterija sadrži mehanizam enzimatske bez intervencije koenzima A. Ovaj enzim je poznato da citricasa (oksalacetat-citrat-lijaze) ili dezmolaze citrata. Reakcija zahtjeva prisustvo dvovalentnog kationa, koji je u ovom slučaju pruža magnezija.

Reakcija stvara oksaloacetat i piruvat, koji zatim uzrokuju stvaranje organskih kiselina u sredini alkalnog pH nastalog korištenjem izvora dušika. Ove organske kiseline se koriste kao izvor ugljika koje stvaraju karbonate i bikarbonate, što dodatno alkalizira medij.

Način sjetve

Simmons citratni medij treba lagano inokulirati u riblji rep pomoću ravne petlje ili igle i inkubirati 24 sata na 35-37 ° C. Na kraju vremena rezultati se promatraju.

Sjetva se vrši samo na površini agara. Nemojte bušiti.

interpretacija

Ako je medij izvorne boje (zelene boje) i nema vidljivog rasta, test je negativan, ali ako se medij promijeni u plavo, to ukazuje na prisutnost alkalnih proizvoda, što se detektira pomoću pH indikatora. U ovom slučaju test je pozitivan.

To se događa zato što ako bakterija koristi ugljik citrata, također je sposobna uzeti dušik amonijevog fosfata s kojim oslobađa amonijak, alkalizirajući medij..

S druge strane, ako se promatra rast bakterija u podlozi, ali nema promjene u boji, također test treba uzeti u obzir pozitivno, jer ako postoji rast znači da je bakterija bila u mogućnosti koristiti citrat kao izvor ugljika, čak i ako je došlo do promjene pH u vrijeme (ponekad to može potrajati).

Ako postoji sumnja u tumačenju konačne boje, može se usporediti s cijevi neinokuliranog citrata.

priprema

Odviti 24,2 g dehidriranog medija za jednu litru vode. Izmiješati i ostaviti stajati približno 5 minuta. Završiti otapanje medija zagrijavanjem 1 ili 2 minute, često miješajući.

Posudite 4 ml u epruvete i 15 minuta autoklavirajte na 121 ° C. Kada napuštate autoklav, nagnite se pomoću nosača na takav način da se agar stvrdne u obliku vrha flaute s malom krpom ili dnom i više kosina.

Konačni pH citratnog medija je 6,9 ​​(zeleno). Ovaj medij je vrlo osjetljiv na promjenu pH.

Pri pH 6 ili nižem, medij postaje žut. Ova boja nije uočena u testu s bakterijama.

A pri pH 7,6 ili iznad, medij se mijenja u intenzivno prusko plavo.

upotreba

Simmons citratni agar koristi se za identifikaciju određenih mikroorganizama, posebice bacila iz obitelji Enterobacteriaceae i drugih bacila glukoze koji ne fermentiraju..

Završna razmatranja

Simmonsov citratni medij vrlo je osjetljiv test, jer se mogu dobiti lažno pozitivni rezultati ako se naprave određene pogreške.

Potrebno je poduzeti sljedeće mjere:

cjepivo

Ne bi vrlo gusta ili na teret bakterijskih cjepiva koji, jer to može uzrokovati bakreno žute umjesto sjemena razvija, bez utjecaja na ostatak pola, ali vjerujem da postoji rast. To ne znači pozitivan test.

Također, gusta cjepivo može generirati lažno pozitivni jer su formirane organski spojevi u stjenkama stanice umiru bakterija može osloboditi dovoljno ugljik i dušik za uključivanje pH indikator.

Stoga je idealno da se umjesto platinske ručke posadi igla kako bi se izbjeglo uzimanje viška materijala.

zasađen

S druge strane, kada se baterija zasađeno za biokemijske identifikacije organizma u pitanje testovima, važno je da test citrat je prva se inokulirati, protiv okretanja proteina ili ugljikohidrata koji drugi način.

Pod tim okolnostima moguće je dobiti lažno pozitivan rezultat, jer će se bilo koja od ovih supstanci koje se pojave pogrešno metabolizirati i uzrokovati promjenu pH vrijednosti..

Drugi način da se izbjegne povlačenje tvari je spaljivanje ručke i uzimanje novog inokuluma između jednog testa i drugog.

Treba također paziti na dodirivanje kolonije kako bi se izvršio inokulum, jer treba izbjegavati povlačenje dijela agara iz kulture iz koje dolaze bakterije, zbog prethodno objašnjenog..

U tom smislu, Matsen, Sherris i Branson preporučuju razrjeđivanje inokuluma u fiziološkoj otopini prije inokulacije citratnog testa kako bi se izbjegao prijenos drugih izvora ugljika..

Intenzitet boje

Mora se uzeti u obzir da intenzitet boje proizvedene kada je test pozitivan može varirati ovisno o komercijalnoj kući.

Osim toga, postoje mikroorganizmi koji su pozitivni na test u 24 sata, ali postoje i drugi sojevi koji zahtijevaju 48 sati ili više da proizvedu promjenu pH vrijednosti..

reference

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokemijski testovi za identifikaciju bakterija od kliničkog značaja. 3. izd. Uvodnik Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka dijagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. 5. izd. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.
  4. BD Laboratories BBL Simmons citratni agar nagiba. 2015. Dostupno na: bd.com
  5. Laboratories Britania. Simmons Citrate Agar. 2015. Dostupno na: britanialab.com
  6. Valtek dijagnostičke laboratorije. Simmons Citrate Agar. 2016. Dostupno na: andinamedica.com.