Agar CLED temelj, uporaba i priprema



CLED agar (Cystine-Lactose-Electrolytes-Deficient) je diferencijalni kruti medij kulture, koji se koristi za dijagnosticiranje infekcija mokraćnog sustava. Sastav medija kulture je dizajniran za dobar rast patogena mokraće i idealan je za kvantifikaciju jedinica koje formiraju kolonije (CFU).

CLED medij kulture nije selektivan, jer u njemu mogu rasti Gram-negativni i Gram-pozitivni mikroorganizmi. No, to nije problem, jer je većina infekcija mokraćnog sustava uzrokovana jednom vrstom mikroorganizama.

U slučaju polimikrobnih infekcija mogu se dobiti 2 ili 3 različite bakterije, ali je vrlo rijetko i većinu vremena onečišćeni uzorci.

Među gram-negativnim bakterijama koje mogu rasti u ovom mediju su bacili koji pripadaju obitelji Enterobacteriaceae i druge crijevne bacile, uropatogene koji se najčešće izoliraju u uzorcima urina, slijedeći: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, među ostalima.

Isto tako, među Gram-pozitivnim bakterijama koje mogu rasti u ovom mediju su Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp i mogu čak uzgajati kvasac, poput kompleksa Candida albicans.

Međutim, zbog kemijskog sastava medija ne dopušta rast nekih zahtjevnih genitourinarnih patogena, kao što je Neisseria gonorrhoeae, gardnerella vaginalis, među ostalima.

indeks

  • 1 Temelj CLED agara
  • 2 Temelj CLED agara (Bevis)
  • 3 Upotreba
    • 3.1. Sjetva uzoraka urina
    • 3.2 Tumačenje
    • 3.3 Identifikacija
  • 4 Priprema
  • 5 Reference

Temelj CLED agara

CLED medij kulture ima kao izvor energije mesni ekstrakt, hidrolizat kazeina gušterače i želatinski hidrolizat. Oni osiguravaju hranjive tvari za razvoj nezahtjevnih bakterija.

Sadrži i cistin, aminokiselinu koja omogućuje rast koliformnih bakterija koje se razlikuju po svojoj maloj veličini.

Isto tako, laktoza sadrži ugljikohidrate koji se mogu fermentirati, zbog toga je taj medij različit; da mogu razlikovati fermentirajuće bakterije od nefermentirajuće laktoze.

Bakterija pretvoriti bi pH kisele proizvodnje za razvoj žute kolonije, a ne fermantativ bakterije ne stvaraju promjene u okolini, tako da boju izvornom agar, zelena.

Reakcija fermentacije se otkriva zahvaljujući prisutnosti pH indikatora, koji je u ovom mediju bromtimol plavo.

S druge strane, niska koncentracija elektrolita u mediju inhibira tipični invazivni rast roda Protej, naziva se učinak rojenja. To stvara prednost u odnosu na druga sredstva, budući da omogućuje brojanje UFC-a, uključujući i prisutnost roda Proteus.

Međutim, niska koncentracija elektrolita inhibira rast nekih vrsta roda Shigella, što je to nedostatak u odnosu na druga sredstva.

Osnova CLED agara (Bevis)

Postoji varijanta ili modifikacija ovog medija koju je proizveo Bevis, koji je u izvorni sastav ugradio izvorni sastav fuksinske kiseline (Andrade indikator). Djeluje zajedno s bromotimol plavom kako bi razlikovala fermentaciju od ne-fermentirajućih bakterija.

Razlika između konvencionalne metode i modificiranog boja je usvajanje kolonije. U slučaju laktoze bakterija, kolonije razviti crvenkasto naranče s ružičastom ili crvene halo, a nonfermenters su plavo-siva.

aplikacije

CLED agar se koristi isključivo za sjetvu uzoraka urina. Upotreba ovog medija posebno je česta u europskim laboratorijima, dok je u Americi manje korištena.

Prikupljanje uzorka mora zadovoljiti određene parametre kako bi se dobili pouzdani rezultati, uključujući:

  • Ne uzimajući antibiotike prije uzimanja uzorka.
  • Poželjno je uzeti urin od prvog sata ujutro, jer je koncentriraniji, kada nije moguće uzeti uzorke invazivnim metodama.
  • Temeljito oprati genitalije prije uzimanja uzorka.
  • Bacite prvu struju za mokrenje i stavite spremnik.
  • Sakupiti između 25 do 30 ml urina u sterilno označene spremnike.
  • Odnesite odmah u laboratorij okružen ledom.
  • Mora se preraditi prije 2 sata emisije ili hladiti na 4 ° C najviše 24 sata.

Sjetva uzoraka urina

Uzorak urina mora se razrijediti 1:50.

Za razrjeđivanje stavite 0,5 ml mokraće pacijenta i razrijedite s 24,5 ml sterilne fiziološke otopine.

Izmjerite 0,1 ml razrijeđenog mokraće i sijte po površini drigalskim špatulom na CLED mediju. To je metoda zasijavanja naznačena za brojanje kolonija. Zato se koristi u uzorcima urina, jer se rezultati moraju izraziti u CFU / ml.

Za kvantifikaciju tih kolonija, postupite na slijedeći način: Broj kolonije i pomnožiti sa ploče 10, a zatim 50. Tu se dobiva broj CFU / ml urina.

interpretacija

Brojanje iznad 100.000 CFU / ml

Brojanje ispod 1000 CFU / ml - Nema infekcije

Brojanje između 1000-10,000 CFU / ml - Sumnjivo, moguća kontaminacija, ponavljanje uzimanja uzoraka.

identifikacija

Kolonije koje su uzgajane na CLED agaru trebale bi biti Gram i ovisno o morfotimpektivnim karakteristikama mikroorganizma određena subkultura.

Na primjer, ako se radi o gram negativnom bacilu, on će se sijati na MacConkey agar, gdje se potvrđuje fermentacija ili ne laktoza. Dodatno, dodaje se hranjivi agar za izvođenje testa oksidaze.

U slučaju da Gram otkriva Gram pozitivne koke, može se subkultivirati u slanom manitol agaru i hranjivom agaru. U potonjem se izvodi test katalaze. Konačno, ako se promatraju kvasci, sijati će se na Sabouraud agar.

Mnogi laboratoriji izbjegavaju uporabu CLED medija i preferiraju koristiti samo krvni agar, MacConkey i hranjivi agar za sijanje uzoraka urina..

priprema

U bočici s jednom litrom destilirane vode, otopiti 36,2 gr praškastog klara agara. Nakon 5 minuta odmora, zagrijati resuspendirani agar, stalno miješajući do vrenja 1 minutu.

Zatim sterilizirajte na 121 ° C 15 minuta u autoklavu. Kada je vrijeme završeno, ukloni se iz autoklava i ostavi da se ohladi do temperature od 45 ° C. Nakon toga se poslužuje između 15 i 20 ml u svakoj sterilnoj Petrijevoj zdjelici.

Postupak za posluživanje ploča mora se provoditi unutar laminarnog poklopca ili ispred Bunsenovog plamenika kako bi se izbjegla kontaminacija.

Pločice koje se poslužuju dopuštaju se da se stvrdnu, naruče se u držač za ploču koji se okrene i pohrani u hladnjak (2-8 ° C) do upotrebe.

Konačni pH pripremljenog medija treba biti 7,3 ± 0,2.

reference

  1. Preporuke za mikrobiološku dijagnostiku infekcije mokraćnog sustava. dice. infectol.  2001; 18 (1): 57-63. Dostupno na: scielo.org.
  2. Panchi J. Identifikacija mikrobiološkog agensa koji uzrokuje infekcije urina kod unutarnjih pacijenata koji prolaze kroz kateterizaciju mokraćnog mjehura. 2016. Preddiplomski rad na natječaju za stjecanje zvanja licencijata u Kliničkom laboratoriju. Tehničko sveučilište Ambato. Ekvador.
  3. Laboratories Britania. Pola CLED. Dostupno na: britanialab.com.
  4. Laboratoriji za Renylab Upute za uporabu, CLED Agar. 2013 Dostupno na: www.renylab.ind.br.
  5. Cultimed Laboratories Osnovni priručnik mikrobiologije. Dostupno na: ictsl.net.
  6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. Opcija CLED agar u rutinskoj kulturi urina. Prospektivna i komparativna procjena. Dijagnostička infekcija mikrobiolima Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
  7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktična klinička mikrobiologija. Sveučilište u Cadizu, drugo izdanje. Služba za publikacije UCA.