Peptonski temelj za pripremu i uporabu

peptonada vode to je neselektivno tekuće sredstvo za obogaćivanje, koje se uglavnom koristi kao razrjeđivač za uzorke hrane ili druge materijale. To znači da je s kemijskog stajališta vrlo jednostavno, sadrži peptone od mesa, natrijev klorid i vodu.

Ima određenu nutritivnu vrijednost, koja omogućuje obogaćivanje uzorka. Ako postoje pohabane bakterije, to znači da može popraviti održivost. Posebno je korisna u oporavku bakterija iz obitelji Enterobacteriaceae.

U slučaju obnavljanja salmonela, preporuča se uporaba puferirane peptonada varijante vode; Ovo služi kao sredstvo za prethodno obogaćivanje uzorka, u ovom slučaju sadrži druge elemente kao što je dinatrijev fosfat i dikalijev fosfat..

Obično pepton voda se dobiva na neutralnom pH, međutim, ako je potrebno druge varijante je pH vrijednost 8.5 ± 0.2 (alkalne), jer se bakterija namijenjen za izoliranje alkalofilne, kao što je Vibrio cholerae.

S druge strane, ovaj medij se može koristiti kao osnovni medij za testove fermentacije ugljikohidrata.

indeks

• 1 Temelj
• 2 Priprema
  • 2.1 Priprema kuće (nekomercijalna)
  • 2.2 Priprema upotrebom komercijalnog medija
  • 2.3 Priprema za ispitivanje fermentacije
  • 2.4 Ostale varijante peptonada vode
• 3 Upotrijebite
  • 3.1 Uzorci stolice
  • 3.2. Uzorci hrane
• 4 Kontrola kvalitete
• 5 Ograničenja
• 6 Reference

temelj

Peptoni osiguravaju hranjive tvari potrebne za razvoj bakterija, posebno aminokiseline dušika i kratkih lanaca, dok natrijev klorid održava osmotsku ravnotežu.

Osim toga, medij omogućuje raspršivanje, homogenizaciju i popravak bakterijskih stanica koje su oštećene industrijskim procesima..

Kao razrjeđivač je idealan, učinkovito zamjenjujući fiziološku otopinu (SSF) ili fosfatni pufer (PBS).

Bakterijski rast je vidljiv promatranjem zamućenosti.

priprema

Domaća priprema (nekomercijalna)

Izvagati 1 g peptona i 8,5 g natrijevog klorida, otopiti u 1 litri destilirane vode. PH treba podesiti na 7,0. Za to možete koristiti 1 N natrijev klorid.

Priprema upotrebom komercijalnog medija

Odviti 15 g dehidriranog medija i otopiti u jednoj litri destilirane vode. Homogenizirajte smjesu. Ako je potrebno, smjesa se kuha 1 minutu kako bi se pomoglo potpuno otapanje. Po potrebi poslužite u bočicama od 100 ml ili u epruvetama od 10 ml. Autoklavirajte na 121 ° C 15 minuta.

Ohladite i koristite ili pohranite u hladnjak. Krajnji pH medija je 7.2 ± 0.2.

Boja dehidriranog medija je svijetlo bež i pripremljena je svijetlo jantarno.

Priprema za fermentacijske testove

Priprema gore-prije biti sterilizirani mora biti dodano ugljikohidrate u konačnoj koncentraciji od 1%, još Andrade pokazatelj (kiseline) ili fuksin fenol crvenog (0,018 g / L). Za cijevi bili na mjestu zvono Durham za promatranje stvaranje plina.

Druge peptonada varijante vode

-Peptonska voda puferirana ili puferirana

Sadrži enzimski hidrolizat kazeina, natrijev klorid, kalijev dihidrogenfosfat i natrijev hidrogen fosfat dodekahidrat. Konačni pH je 7,0 ± 0,2.

Za njegovu pripremu, izvagati 20 g dehidriranog medija i otopiti u 1 litri destilirane vode. Ostavite stajati približno 5 minuta. Zagrijavajte 1 minutu dok se potpuno ne otopi.

Sipajte u odgovarajuće boce prema potrebi. Sterilizirajte pomoću autoklava na 121 ° C 15 minuta.

-Alkalna voda

Odviti 25 g dehidriranog medija i otopiti u 1 litri vode. Nastavite kako je gore opisano. PH se kreće od 8,3 do 8,7.

upotreba

Inokulum se provodi izravno stavljanjem uzorka.

Koristi se za razrjeđivanje uzoraka, osobito kada se sumnja da postoji oštećenje bakterija. Obično su razrjeđenja 1:10 i 1: 100.

Inkubirajte 24 sata u aerobiozi na 35-37 ° C.

Uzorci stolice

Za uzorke stolice u potrazi za salmonelom, preporuča se uporaba puferirane ili puferirane vode kao medija prije obogaćivanja..

Da biste to učinili, postupite kako slijedi:

Ako se formira stolica, uzmite 1 g uzorka. Ako su tekući, uzmite 1 ml stolice i suspendirajte u epruveti s 10 ml puferirane peptonirane vode. U slučaju rektalnog brisa, materijal koji se nalazi u štapiću ispraznite u epruvetu s puferiranom peptoniranom vodom.

U svim slučajevima dobro promiješajte i homogenizirajte uzorak.

Inkubirajte na 37 ° C 18 do 24 sata. Potom se kultiviraju u bujonu za obogaćivanje, kao što je selenitni cistinski bujon ili tetrationatni bujon na 37 ° C 18-24 sata. Konačno se kultiviraju u selektivnim medijima za salmonelu, kao što su SS agar, XLD agar, Hektoen agar, između ostalih.

Uzorci hrane

Pepton voda koristi kao obogaćivanje medija ili kao jednostavan razrjeđivač, ali ako su vrste Salmonella tražili koristi kao pre-obogaćivanje, kao što je već opisano.

U hrani postupite kako slijedi:

Za krutu hranu teži 25 grama uzorka, a za tekuću hranu 25 ml uzorka. Navedeni dio stavite u tikvice koje sadrže 225 ml peptonirane vode. Promiješajte i homogenizirajte uzorak.

Ako se sumnja da je mikrobiološko opterećenje veliko, mogu se napraviti razrjeđenja ili decimale kako bi se olakšalo brojanje jedinica koje formiraju kolonije (CFU).

Broj razrjeđenja ovisit će o tipu uzorka i analitičkom iskustvu.

Naprotiv, ako se sumnja da je mikrobiološko opterećenje vrlo nisko, nije potrebno napraviti razrjeđenja. Nakon toga, subkultivirati u selektivnim medijima.

U slučaju hrane iz mora, kao što su plodovi mora, riba, među ostalim, u potrazi za Vibrio cholerae ili druge vrste Vibrio, treba koristiti peptonsku vodu podešenu na pH 8,5 (alkalna peptonirana voda).

Kontrola kvalitete

Iz svake pripremljene serije, jedna do dvije epruvete treba inkubirati bez inokulacije tijekom 24 sata u aerobiozi na 37 ° C. Na kraju vremena ne treba promatrati zamućenost ili promjenu boje.

Također, dobro poznati kontrolni sojevi mogu se koristiti za procjenu njihove učinkovitosti:

U tu svrhu mogu se koristiti sljedeći bakterijski sojevi: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

U svim slučajevima očekuje se zadovoljavajući razvoj mikroba, koji se promatra zamućenošću medija.

ograničenja

-Dehidrirani medij je vrlo higroskopan, stoga ga treba držati podalje od vlage.

-Medij se ne smije koristiti ako se promatra neka vrsta pogoršanja.

-Dehidrirani medij za kulturu treba čuvati na temperaturi između 10 - 35 ° C

-Pripremljeni medij treba čuvati u hladnjaku (2-8 ° C).

reference

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B i Velázquez O. Tehnike za mikrobiološku analizu namirnica. 2009, 2nd ed. Kemijski fakultet, UNAM. Meksiko. Verzija za administratora priručnika i dokumenata (AMyD) Kemijskog fakulteta, UNAM 1. Dostupno na: http://depa.fquim.unam.mx
2. Laboratories Britania. Puferirana voda peptonada. 2015. Dostupno na: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Peptonska voda. Dostupno na: foodsafety.neogen.com
4. Laboratories Britania. Peptonska voda. 2015. Dostupno na: britanialab.com
5. Merck Laboratories Puferirana peptonska voda. Dostupno na: merckmillipore.com
6. Laboratoriji Conda Pronadisa. Alkalna voda. Dostupno na: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka dijagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.