Temeljni laktozado juha, priprema i uporaba



juha od laktoze je tekući, neselektivni medij za kulturu, koji se uglavnom koristi kao medij za pred-obogaćivanje u izolaciji sojeva salmonele iz mikrobiološke analize provedene na procesiranoj hrani, mliječnim proizvodima ili vodi. To preporučuje Međunarodna komisija za mikrobiološke specifikacije za hranu (ICMPF).

Medij sadrži enzimatsku digestiju želatine, mesnog ekstrakta i laktoze, tvari potrebne za rast bakterija. Osim toga, laktoza je ugljikohidrat koji se može fermentirati, tako da ga neki koliformi mogu podijeliti s proizvodnjom plina.

Iz tog razloga, američka udruga za javno zdravstvo (APHA) preporučuje bujon za laktozu za vjerojatnu studiju ukupnih i fekalnih koliformnih bakterija, što je kvalificira kao izvrsnu alternativu za zamjenu lauril sulfatne triptozne juhe standardnom tehnikom najsigurnijeg broja (NMP). ), koji se koristi za mikrobiološku analizu uzoraka hrane, mlijeka i površinskih voda, podzemnog, rekreacijskog, kućnog i industrijskog otpada.

indeks

  • 1 Temelj
  • 2 Priprema
  • 3 Upotreba
    • 3.1 Prethodno obogaćivanje
    • 3.2. Analiza ukupnih i fekalnih koliforma
  • 4 Kontrola kvalitete medija
  • 5 Reference

temelj

Za mikrobiološku analizu nekih uzoraka, korak prethodnog obogaćivanja je neophodan da bi se mogao povratiti određeni mikroorganizam koji može biti u vrlo maloj količini ili pod nepovoljnim uvjetima koji krše ili minimiziraju njegovu vitalnost..

Takav je slučaj suhe i prerađene hrane, vjerojatno kontaminirane Salmonellas sp. U tim slučajevima, ako su bakterije prisutne, pretrpjele su fizičko i kemijsko zlostavljanje tijekom proizvodnog procesa..

Na takav način da su mikroorganizmi izloženi nepovoljnim faktorima kao što su dehidracija, izloženost inhibitornim ili toksičnim proizvodima, te preklapanje koje nastaje zbog prisutnosti drugih bakterija u većoj količini, između ostalih..

U tom smislu, laktozni bujon ima popravljajući učinak na oštećene strukture mikroorganizma, uzrokujući da se oporavi i reproducira, na takav način da se može otkriti..

Isto tako, laktozni bujon ima sposobnost razrjeđivanja inhibitornih tvari koje mogu utjecati na njegovu vitalnost, dopuštajući njegov razvoj. Nadalje, nutritivni sastav laktozne smjese strateški je za poboljšanje rasta Salmonella sp iznad drugih mikroorganizama.

Za konačnu identifikaciju, ona se mora kultivirati prema drugim sredstvima definiranih usjeva.

S druge strane, sastav medija također omogućuje detektiranje mikroorganizama koji fermentiraju laktozu koji proizvode plin.

priprema

Za pripremu jedne litre laktozne smjese izvagati 13 grama dehidriranog medija i otopiti u 1000 ml destilirane vode.

Kako bi se otopio medij u vodi, otopinu možete malo zagrijati, ali ne previše..

Jednom homogena, otopina se priprema na sljedeći način: ako se juha koristi za traženje koliforma, priprema se stalak s epruvetama, a Durhamova fermentacijska cijev se stavlja naopako.

Durhamova cijev je vrlo važan detalj, jer će omogućiti otkrivanje nastajanja plina, vrijedne podatke u potrazi za koliformima.

Kada su epruvete spremne, u njih se stavlja 10 ml laktozne juhe, što mora biti dovoljno da pokrije cijelu Durham cijev..

Ako se juha od laktoze koristi kao pred-obogaćena juha, nije potrebno smjestiti Durham fermentacijsku cijev. U ovom slučaju, potrebna je veća količina medija (225 ml), koji će biti poslužen u bocama od 500 ml, široka usta i sa termo-otpornom navojnom kapom..

Zatim se epruvete ili tikvice vode u autoklav na 121 ° C 15 minuta.

Medij treba ostati pri konačnom pH 6,9 ± 0,2 na 25 ° C.

Vina se čuvaju u hladnjaku dok se ne upotrijebe.

Prije uporabe, juhe moraju biti kaljene na sobnoj temperaturi.

S druge strane, juha od laktoze se također može pripraviti u dvostrukoj koncentraciji.

Neki laboratoriji dodaju bromokrezolno ljubičasto u laktoznu smjesu kao indikator pH, kako bi pokazali epruvete gdje je došlo do fermentacije laktoze promjenom boje. U ovom slučaju juha ima ljubičastu boju i ako fermentacija postane žuta.

aplikacije

U laboratorijima za mikrobiologiju bujon s laktozom naširoko se koristi kao relativno jeftin medij koji nudi pouzdane i brze rezultate (24-48 sati).

Može se upotrijebiti za analizu ukupnih i fekalnih koliformnih bakterija u vodi i hrani ili kao prednamjerni bujon za salmonelu.

Preenrichment

Prethodno obogaćivanje je korak prije obogaćivanja uzorka, što uvelike poboljšava oporavak bakterija roda Salmonella u prerađenoj hrani.

Da bi se to postiglo, uzorak krute hrane (25 grama) ili tekućine (25 ml) se zasije u 225 ml laktozne juhe i inkubira 24 do 48 sati. Nakon toga, selenitni cistinski bujon ili tetrationatni bujon će se subkulturirati u obogaćenom mediju. Zatim prelazi na selektivne medije XLD i SS.

Analiza ukupnih i fekalnih koliforma

To je izvrsno sredstvo kao pokazatelj fekalne kontaminacije.

Stoga je laktozna bujon idealna za vjerojatnu fazu koliformne studije metodom najvjerojatnijeg broja.

Za uzorke u kojima se sumnja na veliku količinu koliformnih bakterija inokulira se manja količina koliformnih bakterija (1 ml), dok se za uzorke kod kojih se sumnja na manju količinu koliformnih bakterija inokulira više volumena (10 ml)..

Izrađeno je 10 razrjeđenja za analizu-1, 10-2, 10-3, za svaku korištenu koncentraciju stvaraju bateriju od 3-5 cijevi.

Iz svakog razrjeđenja isti volumen je posijan u laktozne bujone.

Epruvete su inkubirane 24 sata. Bujoni koji su negativni inkubirani su još 24 sata.

Tumačenje rezultata se postiže promatranjem dviju karakteristika: prva je prisutnost ili odsutnost zamućenosti i kako ovaj medij ne sadrži pH indikator, neće biti promjene u boji.

Drugi je proizvodnja plina ili ne. Plin se lako demonstrira u Durhamovoj cijevi, pojavom jednog ili više mjehurića zraka.

Smatra se pozitivnim ako se promatraju obje karakteristike, odnosno zamućenost proizvodnje plina. Pozitivne epruvete treba ponovno nasaditi u potvrdnom mediju (bujon Brilliant Green 2% žuč i EC bujon).

Kontrola kvalitete medija

- U pripremi medija važno je ne zaboraviti staviti Durhams cijevi ako je svrha istog proučavanje koliforma.

- Nemojte pregrijavati medij prije sterilizacije.

- Distribuirajte u epruvete prije sterilizacije, nikada poslije.

- Nemojte ga koristiti ako medij ima više od 3 mjeseca pripreme.

- Ne koristite ako primijetite bilo kakvu promjenu u uobičajenim svojstvima medija.

- Prilikom pripreme šarže laktozne bujone, ispitajte kakvoću proizvoda uzgojem sojeva poznatih kao Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii i Klebsiella pneumoniae. Vrlo dobro rastu, uz proizvodnju plina (pozitivna kontrola).

- Također može uključivati Pseudomonas aeruginosa, Salmonela typhimurium ili Enterococcus faecalis, koji dobro rastu, ali bez proizvodnje plina (negativna kontrola).

- Treba napomenuti da je izvorna boja dehidriranog medija bež, a boja pripremljena vrlo bistra i prozirno žuta. Ako dođe do promjene boje ili izgleda, može doći do propadanja iste.

reference

  1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biologija i mikrobiologija okoliša. (2013) 1. izdanje. Sveučilište Cartagenas, Kolumbija.
  2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B i Velázquez O. (2009). Tehnike za mikrobiološku analizu hrane. 2nd ed. Kemijski fakultet, UNAM. Meksiko.
  3. Laboratoriji Conda Pronadisa. 2017. Dvostruka koncentracija laktozne juhe (European Pharm.)
  4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Usporedba tehnika ekstrakcije koliformnih bakterija iz jezerskog sedimenta Xochimilco, Meksiko. Rev. argent. Microhiol.  2013 45 (3): 180-184. Dostupno na: scielo.org.
  5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Određivanje mikrobiološke kakvoće artesijanskih bušotina općina središnje, Cordillera i Capital odjela. Mem. Inst. Investig. Cienc. zdravlje 2013 11 (1): 5-14. Dostupno od: scielo.iics.