Temelj, priprema i upotreba EC bujona

EC juha ili juha Escherichia coli To je selektivni tekući medij za kulturu. Ovaj medij preporučuje se standardnim metodama za brojanje ukupnih i fekalnih koliforma, tehnikom najvjerojatnijeg broja (NMP) u uzorcima vode i hrane, gdje je glavni uzročnik Escherichia coli.

EC juha se sastoji od tripteina, laktoze, žučnih soli, dikalijevog fosfata, monokalijevog fosfata, natrijevog klorida i vode. Njegova formula je strateški osmišljena kako bi pogodovala rastu ukupnih i fekalnih koliforma i spriječila razvoj drugih pratećih mikroorganizama.

Bakterija Escherichia coli je glavni fekalni koliform koji je prisutan kao kontaminant u vodi i izvorima hrane, uzrokujući važne gastrointestinalne poremećaje.

Treba napomenuti da postoji mnogo serotipova Escherchia coli; među njima možemo spomenuti enterohemorrhagic (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteropatogene (EPEC), enterotoksigene (ETEC) i enteroaggregative (EAEC).

To znači da može dopustiti razvoj svih njih, ali bez mogućnosti razlikovanja. U tu svrhu moraju se provesti dodatna ispitivanja.

Mikrobiološko istraživanje vode i hrane najvjerojatnijim brojem (NMP) za pretraživanje ukupnih i fekalnih koliforma protokol je koji je usklađen s nekoliko faza; vjerojatna faza, faza potvrde i faza završetka. EC juha se koristi u potvrdnoj fazi.

indeks

• 1 Temelj
  • 1.1 EC bujon
  • 1.2 EC bujon modificiran s novobiocinom
• 2 Priprema
  • 2.1 EC bujon
  • 2.2 EC bujon modificiran s novobiocinom
• 3 Upotrijebite
  • 3.1 Analiza ukupnih i fekalnih koliforma
• 4 Kontrola kvalitete
• 5 Preporuke
• 6 Reference

temelj

EC bujon

EC sredina temelji se na osiguravanju potrebnih nutritivnih elemenata za optimalan razvoj ukupnih i fekalnih koliforma, gdje je bakterija uključena Escherichia coli.

Ove nutritivne elemente osigurava triptein, koji je izvrstan izvor peptida i aminokiselina. Osim toga, on također sadrži laktozu, fermentabilni ugljikohidrat koji daje energiju i omogućuje pokazivanje da li bakterija proizvodi plin.

S druge strane, medij sadrži žučne soli koje osiguravaju selektivni karakter, jer inhibira rast gram-pozitivnih mikroorganizama koji mogu biti prisutni u uzorku..

Isto tako, dikalij fosfat i monokalijev fosfat djeluju kao sustav za uravnoteženje pH vrijednosti. Ovaj sustav je neophodan, jer laktoza sadržana u juhi teži da zakiseli medij kada ga fermentira mikroorganizmima, ali to se kompenzira fosfatnim solima..

Stoga su ti elementi bitni, jer nekontrolirana kiselost može utjecati na pravilan razvoj traženih mikroorganizama.

Sa svoje strane, natrijev klorid stabilizira medij osmotski, dok je voda otapalo prisutnih otopljenih tvari i osigurava tekuću konzistenciju medija..

EC bujon modificiran s novobiocinom

Okrend i Rose stvorili su razne EC juhe, nazvane EC bujon modificirane s novobiocinom. Modifikacija se sastojala u smanjenju koncentracije žučnih soli i dodatku 20 mg / dl novobiocina.

Ova modifikacija pogoduje oporavku sojeva Escherichia coli enterohemorrhagic (O157: H7).

Taj bakterijski serotip uzrokuje ozbiljan hemoragični kolitis koji može uzrokovati hemolitički uremički sindrom (HUS); što pak može uzrokovati akutno zatajenje bubrega, s visokom stopom smrtnosti koja može doseći i do 50% u starijih osoba.

Zbog morbiditeta i mortaliteta koje ova bakterija uzrokuje godišnje zbog konzumiranja kontaminirane hrane, Ministarstvo poljoprivrede Sjedinjenih Američkih Država (USDA) široko preporučuje korištenje ovog sredstva.

priprema

EC bujon

Odviti 37,4 g dehidriranog medija i otopiti u 1 litri destilirane vode. Smjesa treba ostaviti da odstoji 5 minuta. Nakon toga, u izvoru topline, otopi se često.

Kad se jednom otopi, raspodjeljuje se u epruvete prethodno kondicionirane s Durhamovom cijevi. Sterilizirajte u autoklavu na 121 ° C 15 minuta.

PH medija treba biti 6,9 ± 0,2. Boja dehidriranog medija je bež i pripremljena je svijetlo jantarno.

Vina se čuvaju u hladnjaku dok se ne upotrijebe. U vrijeme upotrebe juhe moraju biti na sobnoj temperaturi.

S druge strane, EC juha se također može pripraviti u dvostrukoj koncentraciji.

EC bujon modificiran s novobiocinom

Odvagati 36,7 g dehidriranog medija i otopiti u 1 litri vode. Ostatak pripravka je isti kao gore opisani.

upotreba

Analiza ukupnih i fekalnih koliforma

EC bujon je idealan za potvrdnu fazu proučavanja koliformnih bakterija metodom NMP, kako u uzorcima vode, tako iu farmaceutskim proizvodima i hrani..

Lijen mutne i bujice za proizvodnju plina dobivene u vjerojatnoj fazi treba ponovno posaditi u 2% svijetlo zelenoj žuči i EC bujonu.

Za ukupne koliformne bakterije EC broji se inkubiraju u aerobiozi 24 do 48 sati na 37 ° C, a kod fekalnih koliforma se inkubiraju u aerobiozi 24 do 48 sati na 44 ° C.

U oba slučaja to se tumači na sljedeći način: mutne epruvete s proizvodnjom plina smatraju se pozitivnima. Ako nema proizvodnje plina u 24 sata, inkubacija se nastavlja do 48 sati.

EC pozitivni bujoni prelaze u potpunu potvrdnu fazu, koja se sastoji od ponovnog zasijavanja u selektivnim medijima kao što su Mac Conkey agar, EMB agar ili Endo agar..

Ako se juha koja se koristi EC modificira s novobiocinom, preporučuje se da se pozitivne epruvete reseed na Mac Conkey agaru sa sorbitolom.

Kontrola kvalitete

Kontrola kvalitete mora se provoditi na svakoj seriji pripremljenog medija. Prvo, mora se procijeniti sterilnost medija. U tom smislu, jedna ili dvije juhe se inkubiraju bez inokulacije u aerobiozi tijekom 24 sata na 37 ° C. Očekivani rezultat je prozirna juha bez zamućenja ili promjene boje.

Drugo, treba procijeniti rast poznatih sojeva, za koje se mogu upotrijebiti sljedeće bakterije: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

U svim slučajevima očekuje se zadovoljavajući razvoj mikroba, promatranjem mutne podloge za proizvodnju plina E. coli i bez plina za salmonelu.

Ostali sojevi koji se mogu uključiti u kontrolu su: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Ovi sojevi moraju biti potpuno inhibirani.

preporuke

-Postavljanje Durham cijevi je bitno za proučavanje koliforma.

-Podijelite medij u epruvete prije sterilizacije, nikada poslije.

-Nemojte ga koristiti ako medij ima više od 3 mjeseca pripreme.

-Nemojte koristiti ako postoji bilo kakva promjena u uobičajenim svojstvima medija.

reference

1. Laboratories Britania. EC Medium. 2015. Dostupno na: britanialab.com
2. E. coli enterohemoragične. Centar za sigurnost hrane i javno zdravlje. 2010. Dostupno na: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. Srednje EC. Dostupno na: foodsafety.neogen.com
4. Neogen. Medij EC modificiran s novobiocinom. Dostupno na: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. Otkrivanje, izolacija i karakterizacija Escherichia coli proizvođač toksina Shiga iz svježeg mljevenog mesa iz mesnica u Concepción, pokrajina Tucumán. Rev Microgol by Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Dostupno na: www.scielo.org.