Temelj, priprema i upotreba selenitne juhe



selenitna juha To je selektivni tekući medij za kulturu. Projektirao ga je Leifson za obogaćivanje uzoraka na kojima se sumnja na prisutnost enteropatogenih bakterija iz roda Salmonella..

Ovaj medij udovoljava zahtjevima Američke udruge za javno zdravstvo (APHA), te je stoga prihvaćen za istraživanje prisutnosti salmonele u uzorcima stolice, urinu, tekućoj ili krutoj hrani, između ostalog..

Kemijski sastav koji posjeduje pogoduje obnavljanju tih mikroorganizama i zauzvrat inhibira rast drugih. Uglavnom je toksičan za većinu bakterija iz obitelji Enterobacteriaceae. Međutim, on također omogućuje oporavak sojeva Shigella i ne inhibira rast Pseudomonas i Proteus..

Sastoji se od bezvodnog natrijevog hidrogen selenita, bezvodnog natrijevog fosfata, peptona i laktoze. Tu je i varijanta na koju se dodaje cistin, otuda i ime juhe selenit-cistina.

Trenutno je poželjna upotreba selenit-cistinske bujonije, budući da se dobiva veći postotak oporavka salmonele, ekvivalentan onom opaženom s drugim selektivnim medijem s istom svrhom, kao što je Tetrathionate natrijeva juha..

indeks

  • 1 Temelj
  • 2 Priprema
    • 2.1 - Selena
    • 2.2 Priprema komercijalnog medija
    • 2.3 Varijanta selenit-cistinska juha
  • 3 Upotreba
  • 4 Razmnoženo
  • 5 Kontrola kvalitete
  • 6 Ograničenja
  • 7 Reference

temelj

Peptoni sadržani u juhi služe kao hranjive tvari za pravilan razvoj mikroorganizama. Sojevi salmonele koriste peptone kao izvor dušika, vitamina i aminokiselina.

Laktoza je fermentabilni ugljikohidrat, dok je natrijev selenit inhibirajuća tvar koja usporava rast gram pozitivnih bakterija i većinu bakterija prisutnih u crijevnoj flori, osobito u obitelji Enterobacteriaceae. Natrijev fosfat je pufer koji stabilizira pH medija.

U slučaju varijante selenitne juhe koja sadrži L-cistin, ovaj dodatni spoj je redukcijski agens koji minimizira toksičnost selenita, povećavajući oporavak salmonele.

priprema

-Selenitna juha

Ako imate sastojke smjese, možete izvagati:

4 g bezvodnog natrijevog hidrogen selenita.

10 g bezvodnog natrijevog fosfata.

5 gr peptonasa.

4 gr laktoze.

Spojevi se otopi u 1 litri sterilne destilirane vode. Može se lagano zagrijati da bi se potpuno otopio.

Neki laboratoriji izlažu medij 10 minuta tečnom parom kako bi ga sterilizirali, jer se autoklav ne smije koristiti. Ako se medij sterilizira, može se pohraniti u hladnjak dok se ne upotrijebi.

Također se može pripremiti bez sterilizacije i posluživanja izravno 10 do 15 ml u sterilne epruvete.

U tom slučaju, treba ga ostaviti da se odmara i koristiti odmah. Budući da medij nije sterilan, ne može se pohraniti u hladnjak za kasniju uporabu.

-Priprema komercijalnog medija

Ako je komercijalni medij dostupan, 23 g dehidriranog medija se izvaže i otopi u jednoj litri sterilne destilirane vode. Kratko se zagrij da završiš rastapanje. Ne sterilizirajte u autoklavu. Poslužite aseptično 10 ili 15 ml u sterilnim epruvetama.

Krajnji pH medija treba biti 7,0 ± 0,2.

Treba napomenuti da je boja dehidriranog medija bež, a preparat je bistar i proziran jantar.

Varijanta selenit-cistinska juha

Sadrži iste spojeve selenitne juhe, ali se dodaje 10 mg cistina. Ostatak postupka je potpuno isti kao što je gore opisano.

aplikacije

Ovaj medij je poseban za primjenu u epidemiološkim studijama, u slučajevima kada bolest nije u akutnoj fazi, asimptomatskim pacijentima ili zdravim nositeljima..

Izolacija roda Salmonella je obično teška, jer se obično utvrdi da onečišćuju uzorke na oskudan način. Biti u malim količinama lako se preklapa rastom drugih bakterijskih rodova koji se nalaze u većoj količini.

S druge strane, sirovina s kojom se obrađena hrana prerađuje često je izložena toplini, procesima dehidracije, korištenju dezinficijensa, zračenja i konzervansa, između ostalog..

Stoga se salmonele prisutne u sirovini loše tretiraju podnošenjem proizvoda gore spomenutim industrijskim procesima. Isto tako, u slučaju kliničkih uzoraka kao što su izmet, sojevi mogu biti slabi ako dolaze od pacijenata koji su liječeni antibioticima..

Prema tome, svaki uzorak u kojem postoji sumnja na prisutnost salmonele mora se prethodno obogatiti u laktoznom bujonu, a zatim obogatiti u selenitnoj juhi kako bi se optimizirao njegov povrat u selektivne medije, kao što je SS agar, ksilozni agar, lizinski deoksiholat (XLD). ), enterički Hektoen agar (HE) i zeleno-svijetli agar, između ostalih.

zasađen

Za uzorke stolice uzeti 1 g uzorka i suspendirati u epruveti s 10 do 15 ml selenitne juhe. Ako stolica je tekućina uzeti 1 ml i suspendirati u juhu. Za brisove rektuma ispraznite materijal brisa u juhu.

U uzorcima čvrste hrane uzeti 1 gr i suspendirati u selenitnoj juhi.

U tekućim namirnicama u jednakim dijelovima miješajte juhu selenita u dvostrukoj koncentraciji.

Za centrifugu uzoraka urina, odbacite supernatant, uzmite sav sediment i suspendirajte ga u selenitnoj juhi.

Bujoni su inkubirani na 37 ° C tijekom 24 sata inkubacije. Bakterijski rast dokazuje zamućenost. Dodatna epruveta po uzorku može također biti uključena da se inkubira na 42 ° C. Nakon toga seju selektivni kruti mediji iz selenitne juhe.

Kontrola kvalitete

Za kontrolu sterilnosti, selenitni bujon iz svake šarže bez inokulacije inkubira se 24 sata na 37 ° C. Očekuje se da nema zamućenja ili promjene boje medija.

Kako bi se kontroliralo dobro funkcioniranje medija, mogu se koristiti poznati sojevi, kao što su:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028,  Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 i Proteus mirabilis ATCC 43071.

Očekivani rezultati su:

  • Za prva tri bakterijska soja rast mora biti zadovoljavajući.
  • u Escherichia coli djelomična inhibicija.
  • Za Proteus umjeren rast.

ograničenja

Srednja selenitna juha je toksična za ljudsku kožu, stoga treba izbjegavati izravan kontakt.

reference

  1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Usporedba medija kulture natrij selenita i tetrationata natrija, oba inkubirana na 37 ° C i 42 ° C izolaciju Salmonela stolica nosača stolice. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
  2. Laboratories Britania. Selenito Caldo. 2015. Dostupno na: britanialab.com
  3. Neogen Laboratories Selenitna juha Dostupno na: foodsafety.neogen.com
  4. González -Pedraza J, Pereira-Sanandres N, Soto -Valela Z, Hernández-Aguirre E, Villarreal-Camacho J. Mikrobiološka izolacija Salmonella spp. i molekularne alate za njegovu detekciju. Zdravlje, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Dostupno na: http://www.scielo.org.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka dijagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.