Soja bujon tripticaseína temelj, priprema i koristi
juha od soje tripticaseína To je tekući medij kulture, vrlo hranjiv i neselektivan. Zbog svoje velike svestranosti, ona je jedna od najčešće korištenih tekućih kultura u mikrobiološkom laboratoriju.
Također je poznat kao bujon tripticasa soja ili digestirani kazein-soja, čija je skraćenica TSB za akronim na engleskom Triptik sam Bujon ili CST za akronim na španjolskom. Njegova upotreba je vrlo raznolika zbog svog sastava. Sastoji se od tripeina, sojinog peptona, natrijevog klorida, dikalijevog fosfata i glukoze.
Sposoban je reproducirati klinički važne patogene bakterije, uključujući i one koje su nutricionistički zahtjevne i anaerobne bakterije. Neke oportunističke gljivice i kontaminanti također se mogu razviti u ovom okruženju.
Zbog svoje visoke nutritivne snage ima visoku osjetljivost za otkrivanje mikrobiološke kontaminacije, zbog toga je izabrana od strane USDA inspekcije za zaštitu životinja i biljaka za mikrobiološku analizu cjepiva..
Isto tako, triptikaza sojina juha ispunjava zahtjeve različitih farmakopeja (Europski EP, Japanski JP i Sjevernoamerička USP) za mikrobiološko istraživanje proizvoda na industrijskoj razini, kao što su kozmetika i hrana..
S druge strane, vrijedi spomenuti da je ovaj medij unatoč svojoj velikoj korisnosti relativno jeftin, pa je pristupačan većini mikrobioloških laboratorija. Također se vrlo lako priprema.
indeks
- 1 Temelj
- 2 Priprema
- 2.1 Sojina tripticamina
- 2.2-Varijanti triptikasein sojine juhe
- 3 Upotrijebite
- 4 Razmnoženo
- 5 Kontrola kvalitete
- 6 Ograničenja
- 7 Reference
temelj
Tripteína, peptone i glukoza pružaju mu bitna hranjiva svojstva kako bi ga pretvorili u idealan medij za brz razvoj mikroba..
Približno 6 do 8 sati inkubacije može se već vidjeti rast u većini mikroorganizama. Međutim, postoje sporo rastući sojevi koji mogu trajati danima da rastu.
Natrijev klorid i dikalij fosfat djeluju kao osmotska ravnoteža, odnosno pH regulator. Prisutnost rasta dokazuje pojava zamućenja u mediju; ako nema rasta, medij ostaje proziran.
Zbog svoje svijetle boje moguće je promatrati proizvodnju pigmenata, poput one prikazane na slici koja se nalazi na početku artikla, što odgovara pigmentu kojeg proizvodi Pseudomonas aeruginosa.
priprema
-Triptična sojina juha
Da bi se pripravio sojin bujon tripticase, vagati 30 grama dehidriranog komercijalnog medija na digitalnoj skali. Zatim se otapa u litri destilirane vode sadržane u fioli.
Smjesa se ostavi stajati 5 minuta i zatim se dovodi do izvora topline da se pomogne u otapanju medija. Trebalo bi je često tresti dok ključa 1 minutu.
Kada se otopi, distribuira se u epruvete odgovarajuće veličine prema potrebi. Mogu se koristiti cijevi s pamučnim čepom ili bakelitnim čepovima. Zatim se epruvete steriliziraju s medijem u autoklavu na 121 ° C tijekom 15 minuta.
PH medija treba biti 7,3 ± 0,2
Potrebno je uzeti u obzir da je boja dehidriranog medija kulture svijetlo bež i da se čuva na 10 do 35 ° C, na suhom mjestu. Dok je pripravljena juha svijetlo jantarna i treba je čuvati u hladnjaku (2 do 8 ° C).
-Varijacije triptikasein sojine juhe
Tripticamin modificirana juha od soje može se pripremiti dodavanjem žučnih soli i novobiocina kako bi bila selektivna za izolaciju E. coli. Druga mogućnost za istu svrhu je priprema triptikaze sojinog bujona nadopunjenog vankomicinom, cefiksimom i teluritom (2,5 μg / ml)..
S druge strane, više glukoze (0,25%) može se dodati u sojin bujon triptikaseina kada je cilj stimulirati formiranje biofilma.
upotreba
To je dovoljno hranjivo da omogući rast zahtjevnih ili dosadnih bakterija kao što je Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp i Brucella sp, nema potrebe za dodatkom krvi ili seruma.
Isto tako, neke gljivice se mogu razviti u ovoj juhi, kao što je Kompleks Candida albicans, Aspergillus sp i Histoplasma capsulatum.
Osim toga, ovaj medij u anaerobnim uvjetima idealan je za oporavak bakterija koje pripadaju rodu Clostridium, kao i za anaerobne ne-sporulirane bakterije od kliničkog značaja..
Ako se doda 6,5% natrijevog klorida može se koristiti za rast Enterococcusa i druge Streptococcus grupe D.
Na razini istraživanja, bio je vrlo koristan u raznim protokolima, osobito u proučavanju bakterija koje tvore biofilmove ili biofilmove. Također se koristi za pripremu bakterijske suspenzije na 0,5% Mac Farlanda potrebnog za provođenje antibiograma metodom Kirby i Bauer..
U tom se slučaju uzimaju 3 do 5 kolonija sličnog izgleda i emulgiraju u 4-5 ml triptikasein sojine juhe. Zatim se inkubira 2 do 6 sati na 35-37 ° C i zatim se podesi sterilnom slanom otopinom na željenu koncentraciju. Triptikaza sojina juha ne smije se koristiti tijekom 18 do 24 sata inkubacije.
zasađen
Uzorak se može sijati izravno ili čistim kolonijama dobivenim iz selektivnih medija. Inokulum bi trebao biti mali tako da ne bi zamaglio medij prije inkubacije.
Normalno se inkubira na 37 ° C u aerobiozi tijekom 24 sata, ali ta stanja mogu varirati ovisno o traženom mikroorganizmu. Također se može inkubirati u anaerobnim uvjetima na 37 ° C nekoliko dana ako je potrebno. Na primjer, u zahtjevnim ili sporo rastućim mikroorganizmima može se inkubirati do 7 dana.
U mikrobiološkoj analizi farmaceutskih supstanci - kao što su cjepiva - protokoli su stroži. U tim slučajevima, juha bez rasta se ne odbacuje dok ne dostigne 14 dana kontinuirane inkubacije.
Kontrola kvalitete
Za svaku pripremljenu šaržu, 1 ili 2 epruvete treba inkubirati bez inokulacije da bi se pokazala sterilnost. Mora ostati nepromijenjena.
Također možete posaditi poznate sojeve da biste procijenili njihovo ponašanje. Među sojevima koji se mogu koristiti su:
Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 ili 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.
U svim slučajevima rast mora biti zadovoljavajući u uvjetima atmosfere i temperature prikladnih za svaki mikroorganizam.
ograničenja
-Fermentacija glukoze uzrokuje smanjenje pH medija proizvodnjom kiselina. To može biti nepovoljno za preživljavanje nekih mikroorganizama osjetljivih na kiselost.
-Ne preporučuje se za održavanje sojeva, jer osim kiselosti, bakterije nakon nekoliko dana iscrpljuju hranjive tvari s posljedičnim nakupljanjem otrovnih tvari koje čine okolinu negostoljubivom..
-Mora se voditi računa o svim protokolima sterilnosti, budući da su juhe lako onečišćene.
-Nakon pripreme triptikasein soje u soji ne pokušavajte prenijeti juhu u drugu sterilnu epruvetu, jer je ova vrsta manevara vrlo osjetljiva na kontaminaciju..
reference
- Cona E. Uvjeti dobre studije osjetljivosti pomoću testa difuzije agara. Rev. chil. infectol. 2002; 19 (2): 77-81. Dostupno na: scielo.org
- Britanski laboratorij Tryteine sojina juha. 2015. Dostupno na: britanialab.com
- Laboratorij MCD. Trytica soja bujon. Dostupno na: electronic-systems.com
- Neogen laboratorij. Sojina supa triptih. Dostupno na: foodsafety.neogen.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka dijagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.
- Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Evaluacija tehnike magnetskog imunosparanja za oporavak Escherichia coli O157: H7 u kremama za mlijeko. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Dostupno na: scielo.org.ve
- Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Formiranje biofilma u izolaciji Staphylococcus aureus prema antimikrobnoj osjetljivosti i kliničkoj provenijenciji. Životopis. 2015 62 (1): 1-8. Dostupno na: saber.ucv.ve
- Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Izolacija Escherichia coli O157: H7 u uzorcima stolice dvostruke namjene goveda iz općine Miranda, država Zulia, Venezuela. Rev. Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Dostupno na: scielo.org