Tetrathionatna juha temelj, priprema i uporaba

tetratna juha ili TT bujon je selektivna tekuća podloga za obogaćivanje i obnavljanje sojeva salmonele. Napravio ju je Müeller, a kasnije ga je modificirao Kauffmann, zbog toga postoje oni koji ga zovu Müeller-Kauffmann bujon.

Izvorni medij sadržavao je proteozne peptone, kalcijev karbonat i natrijev tiosulfat. Kauffmann je dodao žučne soli i stvorio još jedan modalitet sa svijetlozelenom bojom. Ove tvari inhibiraju rast koliforma, ostavljajući slobodan medij za razvoj patogenih bakterija, u ovom slučaju Salmonella.

Modifikacija je bila vrlo uspješna jer je značajno povećala osjetljivost medija. Stoga je trenutno korisno za pretraživanje Salmonella u bilo kojoj vrsti uzorka, ali posebno za krute ili tekuće izmet i hranu..

Priprema se sastoji od dvije faze; komercijalni medij je baza za pripremu tetrationatne juhe, a zatim se za formiranje tetrationata dodaje jodirana otopina joda da bi se završio medij.

Američka udruga za javno zdravstvo (APHA) preporučuje uporabu tentionatne juhe koja je nadopunjena svijetlozelenom za obogaćivanje uzoraka u potrazi za salmonelom, budući da je selektivnija od tetrationatne juhe i selenitne juhe.

Općenito, tetrationatna juha je idealna kada se sumnja da su bakterije roda Salmonella u malim količinama ili koje su zloupotrijebljene izlaganjem inhibitornim tvarima ili industrijskim procesima koji smanjuju njihovu održivost.

indeks

• 1 Temelj
• 2 Priprema
  • 2.1 - Tetrationat
  • 2.2 - Vitalna tetrationatna juha sa svijetlozelenom bojom
• 3 Upotrijebite
• 4 Kontrola kvalitete
• 5 Preporuke
• 6 Reference

temelj

Ovi peptoni odgovaraju digestijama kazein pankreasa i peptičkoj digestiji životinjskog tkiva. Oni osiguravaju izvor ugljika, dušika i hranjivih tvari općenito za rast bakterija.

Sa svoje strane, natrijev tiosulfat reagira s jodiranom otopinom u obliku tetrationata. To inhibira rast koliforma i pogoduje razvoju bakterija koje sadrže enzim tetrationatnu reduktazu, među njima je roda Salmonella, ali i Proteus.

Žučne soli također djeluju kao inhibitorna tvar većine Gram-pozitivnih bakterija i nekih gram-negativnih bakterija (koliformi).

Kalcijev karbonat apsorbira toksične tvari nastale razgradnjom tetrationata, koji tvori sumpornu kiselinu. U tom smislu, kalcijev karbonat neutralizira kiselost koja održava pH stabilnog medija.

U slučaju svijetlozelenog modaliteta, ova tvar povećava selektivnu snagu tetrationatne juhe inhibicijom drugih mikroorganizama osim roda Salmonella..

priprema

-Tetrirati juhu

Jodna otopina joda

žaljenje:

• 6 grama joda.
• 5 grama kalijevog jodida.

Kalijev jodid se otopi u približno 5 ml sterilne destilirane vode, a jod se malo po malo dodaje dok se smjesa zagrijava. Nakon što se potpuno otopi, puni se sterilnom destiliranom vodom dok ne dostigne konačni volumen od 20 ml.

Pola baze za tetrationatnu juhu

Izvagati 46 grama dehidriranog medija i suspendirati u 1 litri sterilne destilirane vode. Miješajte i zagrijavajte dok se potpuno ne otopi, može kuhati samo nekoliko minuta. Ne sterilizirajte u autoklavu. Baza medija se ostavi da se ohladi do oko 45 ° C i tada se doda 20 ml jodirane otopine..

Nakon dodavanja otopine iodurada u medij treba odmah koristiti. Ako ne želite koristiti cijelu smjesu, nastavite kako slijedi:

10 ml osnovnog medija se distribuira u epruvete, i samo 0,2 ml jodirane otopine se doda u one koje treba inokulirati uzorcima..

Oni koji se neće koristiti mogu se i dalje čuvati u hladnjaku, međutim, budući da medij nije steriliziran, idealno je pripremiti potrebnu količinu..

Boja medija prije dodavanja jodirane jodne otopine je mliječno bijela s bijelim talogom i nakon dodavanja je smeđa s gustim talogom. Opaženi talog je normalan i odgovara kalcijevom karbonatu koji se ne otapa. Krajnji pH medija je 8,4 ± 0,2.

-Tetrathionate juha varijanta sa svijetlo zelenom bojom

Za pripremu tetrationatnog bujona sa svijetlozelenom, svi gore opisani koraci se provode, ali dodatno se u smjesu doda 10 ml bistro zelene otopine pripremljene pri 0,1%..

Svijetlo zelena

Ova otopina se priprema kako slijedi:

Izvagati 0,1 g svijetlozelene boje i suspendirati u 100 ml destilirane vode. Zagrijte do ključanja kako biste postigli potpuno otapanje. Uštedite u boci jantara.

upotreba

Za uzorke stolice (kultura stolice) protokol je sljedeći:

Inokulirajte 1 g čvrste stolice ili 1 ml tekuće stolice u epruveti s 10 ml gotove tetrationatne juhe. Stresajte snažno i inkubirajte u aerobiozi na 43 ° C 6-24 sata.

Nakon toga uzeti alikvot od 10 do 20 μl juhe i subkultirati ga u mediju selektivnom za Salmonellu, kao što je SS agar, XLD agar, svijetlo zeleni agar, Hektoen enteralni agar..

Paralelno, selektivne medije za salmonelu treba inokulirati izravnim uzorkom (izmetom) bez obogaćivanja. Za uzorke rektalnih brisa, preuzmite materijal sakupljen u epruvetu i nastavite kako je gore opisano.

Za uzorke hrane vagati 10 g čvrste hrane ili 10 ml tekuće hrane i bocu inokulirati s 100 ml gotove tetrationatne juhe. Nastavite na isti način kao što je gore opisano, ali inkubirajte na 37 ° C.

Kao što se može vidjeti, odnos između uzorka i bujona uvijek će biti 1:10.

Kontrola kvalitete

Da bi se testirao medij kulture, mogu se koristiti poznati kontrolni sojevi. Najčešće se koriste sojevi s ATCC certifikatom.

Sojevi koji će se koristiti su Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 i Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Za sojeve salmonele očekuje se odličan razvoj, dok Escherichia coli može imati slab ili pravilan razvoj, a Gram pozitivni sojevi (Enterococcus i Staphylococcus) su djelomično ili potpuno inhibirani.

preporuke

-Kako ovaj medij ne inhibira rast Proteusa, neki laboratoriji koriste 40 mg / L novobiocina da spriječe razvoj ovog mikrobnog soja. Antibiotik treba dodati prije jodirane otopine joda.

-Nakon pripreme medija, uključujući jodiranu otopinu joda, ne smije biti više od 2 sata nakon inokulacije.

-U trenutku raspodjele medija u epruvete, smjesa se mora neprekidno homogenizirati kako bi se ponovno suspendirao stvoreni precipitat.

-U manje kontaminiranim uzorcima tetrionatni bujon se inkubira na 35-37 ° C, au visoko kontaminiranim uzorcima preporučuje se inkubacija na 43 ° C..

reference

1. Laboratorij Conda Pronadisa. 2010. Baza tetrationatnog bujona prema Müeller-Kauffmannu. Dostupno u:
2. BD Laboratories 2003. Baza Tetrathionate bujona. Dostupno u:
3. Laboratories Britania. 2015. Tetionatna baza. Dostupno u:
4. Mediji BBL. 2005. Priprema epruveta za uzgoj vrste Salmonella.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka dijagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.
6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Usporedba medija kulture natrij selenita i tetrationata natrija, oba inkubirana na 37 ° C i 42 ° C izolaciju Salmonella spp stolice nosača. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220