Temelj EMB-a, priprema i uporaba



EMB agar je selektivni i diferencijalni čvrsti medij za kulturu koji se koristi za izolaciju gram negativnih bacila, uglavnom iz obitelji Enterobacteriaceae, i drugih ne-zahtjevnih gram negativnih bacila. Poznat je i po akronimu EAM, što znači eozin-metilensko plavo.

Ovaj medij kreirali su Holt-Harris i Teague 1916. Sadrži pepton, laktozu, saharozu, dikalij fosfat, agar, eozin, metilensko plavo i vodu. Vrlo je sličan MacConkey agaru, osobito ako se koristi EMB agar modificiran Levinom, koji ne sadrži saharozu..

Zapravo, svaki laboratorij odlučuje radi li s jednim ili drugim, budući da ispunjavaju istu funkciju, iako su biokemijski različite.

Čak ima i isti nedostatak kao i klasični MacConkey agar u smislu proizvodnje roja od roda Proteus. Stoga, kako bi se izbjegla ova pojava, možete povećati koncentraciju agara do 5%.

indeks

  • 1 Temelj
    • 1.1 Selektivno
    • 1.2 Diferencijalno
  • 2 Priprema
  • 3 Upotreba
  • 4 Kontrola kvalitete
  • 5 Završna razmatranja
  • 6 Reference

temelj

selektivan

EMB agar je suptilno selektivan jer sadrži anilinske boje (eozin i metilensko plavo), koje djeluju kao inhibitori, sprječavajući rast većine Gram-pozitivnih bakterija i nekih zahtjevnih gram-negativnih bacila..

Međutim, ovaj agar ima nedostatak da neke Gram-pozitivne bakterije mogu odoljeti prisutnosti inhibitornih tvari i rasti kao male bezbojne točkovite kolonije, kao što su Enterococcus faecalis i neke Staphylococcus.

Također možete uzgajati određene kvasce, kao što su Kompleks Candida albicans, To će dati vrlo male ružičaste kolonije. Čak se i klamidospore mogu razviti iz ovog kvasca ako se uzorak sije dubinom.

diferencijal

S druge strane, EMB agar je također diferencijalni medij, budući da ta bojila zajedno (eozin i metilensko plavo) imaju svojstvo formiranja precipitata na kiselom pH, te stoga služe kao pokazatelji njihove proizvodnje..

Stoga, slabo fermentirajuće bakterije laktoze ili saharoze proizvode ljubičaste kolonije u 24 do 48 sati. Primjerice, rodovi Klebsiella, Enterobacter i Serratia.

Bakterije koje jako fermentiraju laktozu, kao što su Escherichia coli, ili saharoza, kao Yersinia enterocolitica ili Proteus penneri, formiraju zelenkasto-crni precipitat, što daje karakterističan metalni sjaj ovim vrstama.

Treba napomenuti da ako se koristi EMB levinski medij (bez saharoze), Yersinia enterocolitica i Proteus penneri proizvest će transparentne kolonije.

Bakterije koje ne fermentiraju laktozu ili saharozu hrani se prisutnošću peptona koji osiguravaju aminokiseline i dušik potrebne za razvoj bakterija i proizvode prozirne kolonije. Na primjer, rodovi Salmonella i Shigella, među ostalima.

Isto tako, važno je napomenuti da rod Acinetobacter može predstavljati kolonije plave boje lavande, iako nije fermentor laktoze, niti saharoze, ali imaju svojstvo fiksiranja metilenskog plavog u staničnu stijenku. To se također može dogoditi s drugim oksidativnim bakterijama.

priprema

Izvorni dehidrirani medij je svjetlo bež.

Za pripremu ovog medija kulture, 36 grama dehidriranog medija treba odmjeriti i suspendirati u bočici koja sadrži jednu litru destilirane vode..

Nakon ostavljanja smjese 5 minuta u mirovanju, fiolu stavite u izvor topline, miješajući snažno i stalno dok ne prokuha i potpuno se otopi..

Nakon toga, otopljeni medij za kulturu mora se sterilizirati upotrebom autoklava na 121 ° C tijekom 15 minuta.

Na kraju vremena, ukloni se iz autoklava i ostavi da nakratko zastane. Zatim se u svakoj sterilnoj petrijevoj posudi servira još vruća (45 - 50 ° C) između 15 do 20 ml agara. Medij bi trebao biti plavi lakmus.

Nakon posluživanja ploče se ostavljaju blago otkrivene dok se agar malo ne ohladi. Zatim su pokriveni i pušteni da se potpuno skrase. Kasnije se naručuju u okrenutom držaču plaka i čuvaju u hladnjaku (8 ° C) dok se ne upotrijebe.

Ovaj postupak se poželjno izvodi u poklopcu laminarnog protoka ili ispred Bunsenovog plamenika kako bi se izbjegla kontaminacija.

Važno je imati na umu da će svaka komercijalna kuća naznačiti količinu koju treba odmjeriti za pripremu medija kulture.

Krajnji pH medija treba biti 7,2 ± 0,2

aplikacije

Ovaj medij se koristi za sijanje urina i fecesa ili bilo koje vrste kliničkih uzoraka, osobito ako se sumnja na prisutnost ne-zahtjevnih gram-negativnih bacila, kao što su bacili iz obitelji Enterobacteriaceae, koja vrlo dobro raste u ovom mediju..

Enteropatogene bakterije roda Shigella i Salmonella razlikuju se po svojim bezbojnim ili blago jantarnim kolonijama.

Ostali ne-fermentirajući laktozni bacili također rastu, kao što su Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, između ostalih..

Isto tako, ovaj medij je vrlo koristan u mikrobiološkoj analizi hrane i vode, jer je idealan za potpunu potvrdnu fazu određivanja koliformnih bakterija, tj. Za potvrdu prisutnosti E. coli iz zamućenih EC bujona, iz tehnike najvjerojatnijeg broja (NMP).

Kontrola kvalitete

Da bi se potvrdilo da novo kultivirana kultura dobro funkcionira, kontrolni sojevi mogu biti posađeni radi promatranja karakteristika kolonija i potvrditi da daju kako se očekuje.

Za to, ATCC sojevi ili dobro identificirani sojevi E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa i neke Gram-pozitivne bakterije, poput S. aureus.

To se očekuje E. coli Stvorite dobro razvijene plavičasto-crne kolonije sa zelenim metalik sjajem. Sve dok, Enterobacter aerogenes i Klebsiella sp moraju dati dobro razvijene mukozne kolonije plavičasto-crne.

Sa svoje strane, Salmonela typhimurium i Shigella flexneri, moraju se razviti velike kolonije, bezbojne ili blagog jantarnog.

Konačno žanr Pseudomonas aeruginosa raste kao bezbojne kolonije nepravilne veličine, dok Gram-pozitivne bakterije trebaju biti potpuno inhibirane ili rijetko rasti s vrlo malim kolonijama.

Završna razmatranja

Ponekad sterilizacija uzrokuje smanjenje metilenskog plavog, promatrajući narančasti medij. Da bi se metilensko plavo oksidiralo i da bi se ljubičasta boja oporavila, mora se nježno miješati dok se boja ne oporavi.

Također, nakon sterilizacije može se precipitirati boja, pa se mora dobro promiješati prije posluživanja Petrijeve posude.

reference

  1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B i Velázquez O. 2009. Tehnike za mikrobiološku analizu namirnica. 2nd ed. Kemijski fakultet, UNAM. Meksiko.
  2. Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Karakterizacija i distribucija sojeva Escherichia coli Potencijalno patogeni izolati pilića brojlera s peradarskih farmi u Peruu. Rev. veterinar. Peru 2012 23 (2): 209-219. Dostupno na: scielo.org.
  3. Laboratories Conda S.A. Eozinski agar i metilensko plavo. 2010. Dostupno na: condalab.com
  4. Laboratories Britania. Levine E.M.B (s eozinom i metilenskim plavim) 2011. Dostupno na: britanialab.com
  5. BD Laboratories BD EMB agar (Eosin metilen plavi agar), modificiran. 2013. Dostupno na: bd.com
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. (5. izd.). Argentina, Uredništvo Panamericana S.A..
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiološka dijagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Uvodnik