Agar Endo temelj, priprema i uporaba



Endo agar ili medij Endo je kruti, diferencijalni medij kulture s određenim stupnjem selektivnosti. Izvornu formulu napravila je Endo 1904. kako bi se razlikovale bakterije koje fermentiraju laktozu od bakterija koje ne fermentiraju. U početku je bio dizajniran za izolaciju Salmonella typhi, ali kasnije se cilj medija okrenuo potrazi za koliformima.

Princip agar Endo je ostao, ali njegov razvoj je doživjela mnoge promjene tijekom godina. Trenutno, medij se sastoji od peptičkog probavi životinjskog tkiva, laktoza, dikalijevog hidrogen fosfat, natrijev sulfit, osnovno fuksina i agar.

Glavna upotreba medija vezana je za izolaciju i diferencijaciju gram-negativnih bacila iz obitelji Enterobacteriaceae i drugih obližnjih obitelji..

Dugo je bio korišten u otkrivanju koliformnih u uzorcima vode, hrane i mliječni proizvodi, ali sada je preselio koriste ovaj medij druge slične funkcije. Međutim, neki mikrobiologije laboratoriji koristiti ovaj agar za izolaciju Enterobacteriaceae iz kliničkih uzoraka.

indeks

  • 1 Temelj
  • 2 Priprema
    • 2.1 Endo agar
    • 2.2 Varijanta agara m-Endo
  • 3 Upotrijebite
  • 4 Kontrola kvalitete
  • 5 Ograničenja
  • 6 Reference

temelj

Endo agar sadrži peptone koji služe kao izvor aminokiselina, dušika, ugljika i energije, potrebnih za rast nezahtjevnih mikroorganizama.

S druge strane, blago selektivni karakter agara osiguran je dodavanjem natrij sulfita i bazičnog fuksina; obje komponente djelomično ili potpuno inhibiraju razvoj većine Gram-pozitivnih bakterija.

Diferencijalni karakter daje prisutnost fermentabilnog ugljikohidrata, koji je u ovom slučaju laktoza i bazični fuksin, koji također služi kao indikator pH.

Gram-negativne bakterije koje rastu na ovom agaru i mogu fermentirati laktozu, formirat će jake ružičaste kolonije; biti patognomonski Escherichia coli formiranje tamnocrvenih kolonija sa zelenim metalik sjajnim sjajem. To je zbog visoke proizvodnje kiselina iz fermentacije ugljikohidrata.

Treba napomenuti da se medij koji se nalazi oko kolonija također pretvara u jaku ružičastu boju. Dok ne-fermentirajući gram-negativne bacile laktoze tvore blijedo ružičaste kolonije slične srednjim ili bezbojnim.

Dikalijev hidrogen fosfat uravnotežuje pH medija i agar je komponenta koja osigurava čvrstu konzistenciju.

priprema

Endo Agar

Izvaže se 41,5 g dehidriranog medija i otopi se u 1 litri destilirane vode. Grijati smjesu često miješajući dok ne dođe do potpunog otapanja medija. Sterilizirajte u autoklavu na 121 ° C, pod tlakom od 15 lb, 15 minuta.

Nakon uklanjanja iz autoklava, pustiti da se ohladi na temperaturu od približno 45-50 ° C, smjesu se protresti kako bi se homogenizirala prije posluživanja. Ulijte 20 ml u sterilne Petrijeve posude.

Pustite da se ploče učvrste, preokrenu i pohrane u kutiju ili zamotate s tamnim papirom prije pohranjivanja u hladnjak. Vrlo je važno zaštititi pripremljeni medij od izravnog svjetla. Preporučena praksa je pripremiti točan iznos koji će biti potreban.

Ako se čuvaju u hladnjaku, ploče treba prije kaljenja.

PH medija treba biti između 7,2 i 7,6, a boja pripremljenog medija je blijedo ružičasta..

Varijanta agar m-Endo

Druga verzija Endo agar (m-Endo) nakon formuli McCarthy, Delaney i Grasso, koji sadrži više spojeva i razlikuje se u obliku pripravka.

Ova varijanta sadrži: laktoza triptoza, razgrađen kazein enzimska razgrađen enzimom životinjskog tkiva, natrija, dvobaznog kalijevog fosfata, natrij sulfit, ekstrakt kvasca, jednobaznog kalijevog fosfata, osnovno fuksina, natrijev klorid, deoksikolat lauril sulfat natrij i agar.

U tom slučaju, izvagamo 51 g dehidriranog medija i suspendiramo ga u 1 litri destilirane vode koja sadrži 20 ml etanola..

Grijati malo uz miješanje dok se medij potpuno ne otopi. Nemojte pregrijavati i ne sterilizirati u autoklavu. Nakon što je smjesa homogena, poslužite u sterilnim Petrijevim posudama i ostavite da se stvrdne.

upotreba

U nekim se zemljama još uvijek koristi za brojanje ukupnih i fekalnih koliforma u uzorcima vode i hrane, osobito prisutnost Escherichia coli kao glavni pokazatelj fekalne kontaminacije.

M-Endo agar preporuča od strane American Public Association zdravstvu (APhA) za programe praćenja i nadzora dezinfekciju i pročišćavanje otpadnih voda, kao i procjenu kvalitete vode za piće.

Najčešće korištena metoda je membranska filtracija, nakon obogaćivanja uzorka s Lauryl sulfatom u trajanju od 2 do 4 sata..

Također se može koristiti kao zamjena za EMB agara u mikrobiološke analize hrane i vode za najvjerojatnijeg broja (NMP), posebno u potpunoj fazi potvrdna da potvrdi prisutnost E. coli iz mutnih bujona EC.

Kontrola kvalitete

Za procjenu kvalitete pripremljene serije Endo agara, sije se poznati ili certificirani kontrolni sojevi.

Među sojevima koji se mogu koristiti u tu svrhu su: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 i Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Sojevi su sijani iscrpljenjem i inkubirani na 37 ° C tijekom 24 sata u aerobiozi.

Očekivani rezultati su:

  • u Escherichia coli: kolonije jake crvene boje, s metalnim sjajem.
  • u E. cloacae i K. pneumoniae kolonije bi trebale biti ružičaste sluznice.
  • U slučaju S. typhimurium, S. flexneri i P. mirabilis kolonije su obično blijedo ružičaste ili bezbojne.
  • napokon, E. faecalis očekuje se da će biti djelomično inhibiran, stoga bi njegov rast trebao biti slab s vrlo malim kolonijama jake ružičaste boje.

ograničenja

-Endo medij ima nisku selektivnu snagu, stoga je moguće da neki Gram pozitivni mikroorganizmi kao što su Staphylococcus, Enterococcus i čak kvasci mogu rasti.

-U ovom mediju mogu se razviti i drugi bacili koji ne pripadaju obitelji Enterobacteriaceae, kao na primjer Pseudomonas sp i Aeromonas sp. Karakteristike ovih sojeva su bezbojne nepravilne kolonije.

-Ovaj pripremljeni medij je vrlo osjetljiv na svjetlo, dakle produljena izloženost tome pogoršava sustav indikatora, ireverzibilno oštećuje medij.

-Komponente medija smatraju se kancerogenim, stoga treba izbjegavati izravan kontakt.

-Dehidrirani medij je vrlo higroskopan i treba ga čuvati u izvornom spremniku na sobnoj temperaturi, čvrsto zatvoren iu suhom okruženju..

reference

  1. BD Laboratories Endo Agar. 2013. Dostupno na: bd.com
  2. Neogen Laboratories M Endo Agar. Dostupno na: foodsafety.neogen.com
  3. "Agar Endo." Wikipedija, slobodna enciklopedija. 7. ruj 2017., 08:27 UTC. 28. veljače 2019., 22:55. Dostupno na: en.wikipedia.
  4. Laboratorij MercK. Endo agar 2019. Dostupno na: merckmillipore.com
  5. Tehnički list laboratorija. M -Endo Agar LES. 2015. Dostupno na: liofilchem.net