Agar Hektoen temelj, priprema i uporaba



Hektoen agar ili enterički Hektoen agar je čvrsti, selektivni i diferencijalni medij kulture. Stvorio ga je King i Metzger u Institutu Hektoen za izolaciju enteropatogenih bakterija rodova Shigella i Salmonella..

Medij se sastoji od proteoznog peptona, ekstrakta kvasca, žučnih soli, laktoze, saharoze, salicina, natrijevog tiosulfata, natrijevog klorida, željeznog citrata, amonijevog citrata, bromotimol plavog, kiselog fuksina i agara. Ova formulacija omogućuje razlikovanje rodova Shigella i Salmonella od ostalih bakterija koje mogu rasti u ovom mediju..

Iako postoje druga sredstva koja imaju istu funkciju kao Hektoen agar, to predstavlja veću prednost u usporedbi s drugim sredstvima, posebno kada želite oporaviti Shigella vrste..

Vrste obaju rodova izazivaju teške gastrointestinalne probleme kod ljudi zbog konzumiranja kontaminirane hrane; stoga je prijenos fekalno - oralni. Stoga je uporaba Hektoen agara uglavnom naznačena u mikrobiološkoj analizi uzoraka stolice i hrane..

indeks

  • 1 Temelj
  • 2 Priprema
  • 3 Upotrijebite
  • 4 Kontrola kvalitete
  • 5 Ograničenja
  • 6 Reference

temelj

Hektoen agar sadrži peptone i ekstrakt kvasca kao izvor hranjivih tvari, pružajući osnovne elemente za razvoj mikroba.

Međutim, ona također ima i žučne soli koje djeluju inhibiranjem rasta nekih bakterija, osobito Gram pozitivnih i nekih Gram negativnih. Zbog toga se smatra selektivnim medijem.

S druge strane, Hektoen agar je diferencijalni medij. Ovo svojstvo dobiva prisutnost fermentirajućih ugljikohidrata kao što su laktoza, saharora i salicin, zajedno sa sustavom pH indikatora, koji je predstavljen bromtimol plavom i kiselom fuksinom..

Sve bakterije sposobne za uzgoj u ovom mediju koje ne pripadaju rodu Salmonella i Shigella razvit će losos ili narančaste kolonije s izuzetkom roda Proteus. To je zbog fermentacije jednog ili više prisutnih ugljikohidrata, koji zakiseljavaju medij, što uzrokuje okretanje pH indikatora.

Sa svoje strane, roda Shigella i Salmonella ne mogu fermentirati niti jedan prisutan ugljikohidrat, koristeći samo peptonas kao izvor energije, koji alkalizira okoliš i stoga su njegove kolonije plavo-zelene.

I u ovom mediju mogu se izdvojiti bakterije koje mogu tvoriti sumporovodik (bezbojni plin). Natrijev tiosulfat djeluje kao izvor sumpora dok je željezni citrat najjači. Oba spoja omogućavaju stvaranje crnog precipitata željezovog sulfida koji dokazuje reakciju.

Crni precipitat u središtu kolonije s prozirnim orehom daje izgled ribljeg oka. Ova karakteristika sugerira prisutnost roda Salmonella.

Konačno, natrijev klorid održava osmotsku ravnotežu i agar daje čvrstu konzistenciju mediju.

priprema

Izvaže se 76 g dehidriranog medija i otopi u jednoj litri destilirane vode. Mješavinu snažno protresti, a zatim ostaviti da odstoji 10 do 15 minuta. Može se grijati i kuhati, dajući okretna kretanja do potpunog otapanja. Ovaj medij nije autoklaviran.

Kada medij dostigne temperaturu od približno 45 ° C, volumen od 20 ml izravno se izlije u sterilne Petrijeve posude..

Agaru se dopušta da se skrutne. U to su vrijeme spremni za uporabu. Preporučljivo je odmah ih koristiti. Ako to nije moguće, treba ih čuvati u hladnjaku dok se ne upotrijebe.

Ploče treba rano ukloniti iz hladnjaka prije nego što ih posadite kako bi se temperatura u prostoriji.

PH medija treba biti 7,5 ± 0,2. Boja dehidriranog medija je ljubičasta i pripremljena je smeđe-zelena.

upotreba

Upotreba Hektoen agara preporuča se za traženje bakterija roda Shigella i Salmonella u uzorcima stolice i hrane..

Mogućnost izolacije ovih bakterija uvelike se povećava ako je uzorak prethodno obogaćen specijalnim bujonima, kao što su selenitni bujon, selenitni cistinski bujon, tetrationatni bujon itd..

Inokulum mora biti jak i zasijavanje se vrši nasukanjem. Ploče se inkubiraju na 37 ° C tijekom 24 do 48 sati u aerobiozi.

Inkubacija se preporučuje 48 sati jer su karakteristike kolonija jasnije za njihovo tumačenje i diferencijaciju u ovom trenutku.

Kontrola kvalitete

Za provođenje kontrole kvalitete na ovom mediju koriste se certificirani bakterijski sojevi, kao što su: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 i Shigella sonnei ATCC 25931.

Očekivani rezultati su sljedeći: Salmonella typhimurium i  Salmonella enteritidis moraju razviti zeleno-plave kolonije sa ili bez crnog središta. Dok će vrste Shigella rasti kao plavo-zelene kolonije.

Također možete uključiti sojeve Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 i Staphylococcus aureus ATCC 25923.

U tim slučajevima promatrane karakteristike su sljedeće: E. coli i K. pneumoniae U ovom mediju razvit će se kolonije lososa i naranče, a oko njih je talog iste boje. U međuvremenu, Proteus će razviti plavo-zelene kolonije sa ili bez crnog središta.

dok S. aureus i  E. faecalis ponekad bi trebao biti inhibiran E. faecalis uspijeva rasti kao žute kolonije, vrlo male.

S druge strane, zbog toga što ovaj medij nije steriliziran u autoklavu, važno je procijeniti sterilnost medija. Stoga, svaku pripremljenu šaržu treba inkubirati jednu do dvije ploče bez inokulacije na 37 ° C tijekom 24 sata u aerobiozi.

Očito se očekuje da na ploči nema rasta bilo koje vrste.

ograničenja

-Proteus vrste mogu se razviti u ovom okruženju i karakteristike njihovih kolonija mogu se zamijeniti sa Salmonella ili Shigella vrstama. Zbog toga svaka sumnjiva kolonija mora biti potvrđena biokemijskim testovima.

-Potrebno je pratiti uporabu ovog medija s drugim manje selektivnim agarima, jer ako se traženi mikroorganizam nalazi u niskim koncentracijama, možda se neće razviti u ovom mediju..

-Nemojte pregrijavati tijekom pripreme, jer prekomjerna toplina mijenja sastav medija.

-Kolonije salmonele koje fermentiraju laktozu mogu se pojaviti nezapaženo.

reference

  1. Doprinositelji Wikipedije. Hektoen enteralni agar. Wikipedija, slobodna enciklopedija. 13. ožujka 2019., 23:38 UTC. Dostupno na: .wikipedia.org / Pristupljeno 16. ožujka 2019.
  2. BD Laboratories BD Hektoen crijevni agar (HE Agar). 2013. Dostupno na: bd.com
  3. Laboratories Britania. Hektoen enterički agar. 2015. Dostupno na: britanialab.com
  4. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Agar Hektoen agar. Dostupno na: f-soria.es
  5. Difco & BBL Manual, Hektoen enterički agar. 2. izdanje. Dostupno na: bd.com/europe