Agar LIA (Lizin Željezo) temelj, priprema i uporaba



LIA agar (Lizin Željezo) je biokemijski test koji se koristi za identifikaciju bakterija iz obitelji Enterobacteriaceae. Ovaj medij su stvorili Edwards i Fife, na temelju Falkowove formule.

Izvorno je ovaj test bio bujon koji sadrži peptone, ekstrakt kvasca, glukozu, L-lizin, bromokrezol ljubičastu i destiliranu vodu. Edwards i Fife su dodali agar-agar, feri amonijev citrat i natrijev tiosulfat.

Test se u osnovi sastoji od dokazivanja prisutnosti enzima lizin dekarboksilaze, sposobnog za reakciju s karboksilnom skupinom aminokiseline L-lizina. Deaminacija aminokiseline također se može pojaviti zbog prisutnosti enzima lizin deaminaze.

Osim toga, sastav medija omogućuje demonstriranje sposobnosti nekih bakterijskih rodova za proizvodnju vodikovog sulfida. Konačno, moguće je također promatrati proizvodnju plina ili ne u sredini.

indeks

  • 1 Temelj
    • Peptoni i ekstrakt kvasca
    • 1.2 Glukoza
    • 1,3 L-lizin
    • 1,4 Indikator pH (bromokrezol ljubičasta)
    • 1.5 Amonijev željezov citrat i natrijev tiosulfat
  • 2 Tumačenje testa
    • 2.1 Dekarboksilacija lizina
    • 2.2 Deaminacija lizina
    • 2.3 Proizvodnja vodikovog sulfida (H2S)
  • 3 Bilježenje rezultata
  • 4 Priprema
  • 5 Upotreba
  • 6 Reference

temelj

Peptoni i ekstrakt kvasca

Kao i većina medija za kulturu, željezni lizinski agar sadrži komponente koje osiguravaju izvor hranjivih tvari potrebnih za rast bakterija. Ove komponente su predstavljene peptonima i ekstraktom kvasca.

glukoza

Također, ovaj agar sadrži ugljikohidrate glukoze koje se mogu fermentirati. Poznato je da sve bakterije iz obitelji Enterobacteriaceae fermentiraju glukozu.

Ovaj korak je presudan, jer će biti odgovoran za zakiseljavanje medija, bitan uvjet za enzim lizin dekarboksilaza, ako je prisutan, da djeluje na svoj supstrat.

U nekim bakterijskim rodovima može se promatrati proizvodnja plina zbog fermentacije glukoze.

Plin se očituje kada se u epruveti premješta agar, ostavljajući prazan prostor na dnu cijevi ili lomljenjem medija u dva ili više dijelova..

L-lizin

Jednom kada se lizin dekarboksilira, nastaju diamin (kadverin) i ugljični dioksid.

Dekarboksilacija se odvija u prisutnosti koenzima piridoksal fosfata. Ova reakcija je nepovratna.

Indikator PH (bromokrezol ljubičasta)

Sve promjene pH vrijednosti koje se događaju u mediju različitim reakcijama, detektiraju se pomoću pH-indikatora bromokrezola.

U tom smislu, kada dođe do zakiseljavanja, medij postaje žut, a kad je alkalizacija, medij se vraća u izvornu ljubičastu ili ljubičastu boju.

Kada se deaminacija lizina odvija prisutnošću enzima lizin deaminaze, na površini se pojavljuje crvenkasta boja, tipična za rodove Proteus, Providencia i neke vrste Morganella.

To je zbog činjenice da se tijekom procesa deaminacije formira alfa-keto-karbonska kiselina, koja reagira s amonijevim citratom u prisutnosti kisika, što uzrokuje spomenutu boju..

Amonijev željezov citrat i natrijev tiosulfat

S druge strane, bakterije koje proizvode sumporovodik bit će dokazane prisutnošću natrijevog tiosulfata (izvor sumpora) i željezovog amonijevog citrata, koji je developer H2S.

Bakterije koje posjeduju enzim tiosulfat-reduktazu imaju sposobnost djelovanja smanjenjem prisutnog natrijevog tiosulfata, formirajući sulfit i sumporovodik (H).2S).

Potonji je bezbojni plin, ali kad reagira sa solju željeza tvori metalni željezni sulfid, koji je netopljiv spoj (vidljivi crni talog)..

Međutim, kapacitet H formacije2S s ovim medijem nije vrlo pouzdan, jer neke negativne bakterije lizin dekarboksilaze mogu proizvesti H2S neće formirati crni precipitat, jer kiselost medija ometa. Stoga se preporuča provjeriti s drugim sredstvima koja sadrže željezo.

Tumačenje testa

Dekarboksilacija lizina

Epruvete treba očitati nakon 24 sata inkubacije, inače postoji opasnost od pogrešnog tumačenja reakcije, navodeći lažne negativne rezultate..

Mora se imati na umu da će prva reakcija koja će se dogoditi biti fermentacija glukoze, stoga će sve epruvete nakon 10 do 12 sati postati žute..

Ako se na kraju razdoblja inkubacije (24 sata) promatra žuta pozadina s ljubičastom ili ljubičastom površinom, reakcija je negativna. Ljubičasta boja površine odgovara alkalizaciji medija uporabom peptona.

Pozitivna reakcija je ona u kojoj su dno i površina cijevi potpuno ljubičasto, tj. Vraća se u izvornu boju.

Prema tome, tko određuje pozitivnost testa je baza ili dno medija. Ako sumnjate u boju, možete je usporediti s neinoculiranom LIA cijevi.

Deaminacija lizina

Cjevčica koja dokazuje deaminaciju lizina imat će crvenkasto-smeđu površinu i žutu pozadinu (kiselinu), ili cijelu crvenkasto-smeđu cjevčicu..

Ova reakcija se tumači kao negativna za dekarboksilaciju lizina, ali pozitivna za deaminaciju lizina.

Ova reakcija je definirana i interpretirana u kosini.

Proizvodnja sumporovodika (H2S)

Pozitivna reakcija opažena je pojavom crnog taloga u cijelom ili dijelu medija. Općenito između kosine i baze.

Ako se talog pojavi kroz cijev, neće se pokazati druge reakcije koje se pojavljuju u mediju.

Zabilježite rezultate

Prilikom tumačenja testa rezultati se bilježe na sljedeći način:

Prvo pročitajte kosinu, zatim dno ili taco, zatim proizvodnju H2S, i na kraju proizvodnja plina.

Primjer: K / A + (-). To znači:

  • K: Alkalni okvir (ljubičasta)
  • O: Kiselinska (žuta) pozadina, to jest negativna reakcija dekarboksilacije i negativna deaminacija.
  • +: Proizvodnja sumporovodika
  • (-): Bez plina.

priprema

Odviti 35 g dehidriranog lizinskog agara i otopiti u jednoj litri destilirane vode.

Zagrijte dok se agar potpuno ne otopi, pa je kuhajte na minutu i često miješajući. Podijelite 4 ml medija u 13/100 epruvete s pamučnim poklopcem.

Sterilizirajte u autoklavu na 121 ° C 15 minuta. Izvadite iz autoklava i ostavite da se odmara na nagnut način, tako da postoji duboka baza i kratka kosina.

Čuvati u hladnjaku 2-8 ° C. Dopustite da se učvrsti prije sadnje bakterijskog soja.

Boja dehidriranog medija je bež, a medij pripremljen crvenkasto ljubičaste boje.

Konačni pH pripremljenog medija je 6,7 ± 0,2.

Medij postaje žut, s pH jednakom ili manjom od 5,2, i ljubičastom pri pH 6,5.

aplikacije

Ovaj test, zajedno s drugim biokemijskim testovima, koristi se za identifikaciju bacila iz obitelji Enterobacteriaceae..

Medij je posijan ravnom petljom ili iglom, jedan ili dva udarca su napravljena na dnu cijevi, a zatim je površina medija cik-cak.

Inkubira se 24 sata na 35-37 ° C u aerobiozi. Ako je potrebno, inkubira se još 24 sata.

Uglavnom je korisno razlikovati negativne vrste laktoze Citrobacter od Salmonellas sp.

reference

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokemijski testovi za identifikaciju bakterija od kliničkog značaja. 3. izd. Uvodnik Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka dijagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. 5. izd. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.
  4. Laboratories Britania. Lizinski željezni agar. 2015. Dostupno na: britanialab.com
  5. BD Laboratories Nagib agara s BBL lizinom. 2007. Dostupno na: bd.com
  6. Valtek laboratoriji Medium L.I.A. 2009. Dostupno na: andinamedica.com