MacConkey Agar temelj, priprema i uporaba



MacConkey agar To je kruti medij kulture koji omogućuje isključivu izolaciju gram-negativnih bacila. Zbog toga je selektivni medij i također omogućuje razlikovanje između fermentirajućih i nefermentirajućih bacila laktoze, što ga čini diferencijalnim medijem. To je jedan od najčešće korištenih medija u mikrobiološkom laboratoriju.

Ovaj medij se uglavnom koristi za izolaciju gram-negativnih bacila koji pripadaju obitelji Enterobacteriaceae, uključujući oportunističke i enteropatogene vrste.

Također se može koristiti za izoliranje drugih crijevnih bacila koji obitavaju u gastrointestinalnom traktu, ali ne pripadaju Enterobacteriaceae, kao Aeromonas sp, Plesiomonas sp, među ostalima.

Konačno, može izolirati i druge gram-negativne, ne-fermentirajuće bacile glukoze koji se nalaze u okolišu, vodi ili tlu, ali koji ponekad mogu biti oportunistički patogeni kao što su Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alkaline sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia, među ostalima.

indeks

  • 1 Temelj
    • 1.1 MacConkey agar
  • 2 Priprema
  • 3 Upotreba konvencionalnog MacConkey agara
  • Ostale varijante MacConkey agara
    • 4.1 MacConkey agar sa sorbitolom
    • 4.2 MacConkey agar bez kristalne ljubičice ili soli
    • 4.3 MacConkey agar s cefoperazonom
    • 4.4 MacConkey agar pripravljen s 10% morske vode v / v
  • 5 Reference

temelj

MacConkey Agar

Temelj ovog medija može se objasniti opisom njegovih sastavnih dijelova, jer svaki od njih ima svrhu koja određuje njezino svojstvo.

Žučne soli i kristal ljubičice

U tom smislu, MacConkey agar ima složeni sastav. Prije svega sadrži žučne soli i kristal ljubičice.

Ti su elementi odgovorni za inhibiciju rasta Gram-pozitivnih bakterija i nekih zahtjevnih gram-negativnih bacila. S druge strane, to pogoduje razvoju gram negativnih bacila na koje te tvari ne utječu. Zato je to selektivni medij.

Kaže se da je on malo selektivan u usporedbi s drugim medijima koji također inhibiraju rast gram-pozitivnih bakterija, kao i većine Gram-negativnih bakterija.

Izuzetno je selektivan za određeni rod, kao što je TCBS agar za izolaciju Vibrio cholerae i druge slične halofilne i alkalofilne vrste.

Peptoni, polipektoni i laktoza

Sadrži tvari koje daju potrebne hranjive tvari mikroorganizmima koji se razvijaju u ovom mediju, kao što su peptoni, polipektoni i laktoza.

Laktoza je ključna točka za medij kao diferencijalni medij, jer mikroorganizmi koji imaju sposobnost fermentacije laktoze će razviti jake ružičaste kolonije.

Neke bakterije mogu fermentirati laktozu polako ili slabo, razvijajući blijedo ružičaste kolonije i ostaju pozitivne laktoze.

Oni koji ne fermentiraju laktozu koriste peptone kao izvor energije, proizvodeći amonijak, alkalizirajući medij. Stoga, kolonije koje potječu su bezbojne ili transparentne.

PH indikator

Promjena boje postiže se drugim esencijalnim spojem koji ima MacConkey agar. Ovaj spoj je pH indikator, koji je u ovom slučaju neutralan crveni.

Fermentacija laktoze stvara proizvodnju miješanih kiselina. Medij se zakiseli na pH ispod 6,8..

To uzrokuje da se pH indikator okrene prema intenzivnoj ružičastoj nijansi. Intenzitet boje može varirati ovisno o konačnom pH.

Destilirana voda, natrijev klorid i agar

S druge strane, sadrži destiliranu vodu i natrijev klorid koji medijima daju hidrataciju i osmotsku ravnotežu. Konačno, medij sadrži agar, koji je baza koja osigurava konzistenciju čvrstog medija.

Pripremljeni agar MacConkey agar mora imati konačni pH podešen na 7,1 ± 0,2..

priprema

Za jednu litru MacConkey agara treba izvagati 50 g dehidriranog medija, zatim staviti u fiolu i otopiti u jednoj litri destilirane vode. Nakon 10 minuta odmora zagrijava se konstantnim miješanjem dok ne prokuha 1 minutu.

Zatim stavite fiolu u autoklav i sterilizirajte na 121 ° C 20 minuta. Na kraju vremena, uklanja se iz autoklava i ostavi da se ohladi na temperaturu od 45 ° C, a zatim se služi u sterilnim Petrijevim posudama unutar poklopca laminarnog protoka ili ispred Bunsenovog plamenika..

Ostaviti da se skrutne i pohraniti u držač ploče koji se okrene i staviti u hladnjak na 2-8 ° C do uporabe.

Da bi se dobio MacConkey agar koji inhibira efekt bubrenja proizveden rodom Proteus, koristi se MacConkey agar s niskim sadržajem soli..

Upotreba konvencionalnog MacConkey agara

MacConkey agar je uključen u sve setove medija kulture koji su uređeni za sjetvu kliničkih uzoraka primljenih u laboratorij. Također je korisna u mikrobiologiji hrane i mikrobiologiji okoliša.

Različiti gram negativni bacili koji rastu u ovom mediju izražavaju fenotipske karakteristike koje pomažu u pretpostavljenoj dijagnozi dotične vrste. Na primjer, veličina, boja, konzistencija i miris kolonija su neke od značajki koje mogu voditi.

U ovom okruženju, vrste Escherichia coli, Klebsiella sp i Enterobacter sp proizvode jake ružičaste kolonije, okružene područjem precipitirane žuči.

U toliko bakterija kao Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp i Hafnia sp mogu se pojaviti bez boje nakon 24 sata ili blijedo ružičaste za 24 do 48 sati.

Isto tako, rodovi Proteus, Edwadsiella, Salmonella i Shigella proizvode bezbojne ili prozirne kolonije.

Ostale varijante MacConkey agara

Postoje i druge varijante MacConkey agara koje imaju specifične svrhe. Zatim se spominju:

MacConkey agar sa sorbitolom

Ovaj medij je dizajniran za razlikovanje enteropatogenog soja (Escherichia coli enterohemorhagic O157: H7) ostatka sojeva Escherichia coli.

Ovaj medij mijenja ugljikohidrat laktozu za sorbitol. Sojevi E. coli enterohemoragijski O157: H7 se razlikuju od ostalih jer ne fermentiraju sorbitol i stoga se dobivaju transparentne kolonije, ali ostatak sojeva E. coli ako fermentiraju sorbitol i kolonije su jake ružičaste boje.

MacConkey Agar bez kristalne ljubičice ili soli

Ovaj agar razlikuje se mnogo od klasičnog MacConkey agara, budući da nema kristalno ljubičastu, Gram-pozitivne bakterije mogu rasti.

S druge strane, odsutnost soli inhibira pojavu rojenja na agaru kojeg proizvode neke crijevne bacile, poput onih iz roda Protej, i tako olakšati izolaciju svih prisutnih bakterija, uključujući Gram-pozitivne bakterije.

MacConkey agar s cefoperazonom

Ova varijanta MacConkey agara je dizajnirana da se inicijalno izolira Laribacter hongkongensis a kasnije su shvatili da je to korisno za izolaciju Arcobacter butzleri.Oba su blago zakrivljena negativna Gramska bacila otporna na cefoperazon.

Ove bakterije su nedavno povezane kao uzroci gastroenteritisa i proljeva stečenih u azijskim i europskim pojedincima, koji se pojavljuju kao dva moćna patogena u nastajanju.

Antibiotik dopušta inhibiciju prateće flore gastrointestinalnog trakta, što pogoduje razvoju tih bakterija, sprječavajući ih da prođu nezapaženo, budući da im je potrebno 72 sata za rast.

MacConkey agar pripremljen s 10% morske vode v / v

Ova varijanta korisna je za procjenu bakterijskih zdravstvenih pokazatelja fekalne kontaminacije, uključujući ukupne koliformne i fekalne koliforme u rekreacijskim slanim vodama (plaže i uvale)..

Cortez i sur. 2013 pokazali su da medij pripremljen na ovaj način značajno povećava oporavak tih mikroorganizama u slanoj okolini, u usporedbi s upotrebom MacConkey agara pripremljenog s destiliranom vodom..

To je zbog toga što modificirani medij stimulira rast bakterija koje su fiziološki u stanju mirovanja "održive, ali ne obrađive", te se stoga ne mogu obnoviti u konvencionalnim medijima..

reference

  1. Lau SK, Woo PC, Hui WT, i sur. Upotreba cefoperazon MacConkey agara za selektivnu izolaciju Laribacter hongkongensis. J Clin Microbiol. 2003; 41 (10): 4839-41.
  2. "MacConkey Agar." Wikipedija, slobodna enciklopedija. 4 tra 2018, 18:16 UTC. 29 Pro 2018, 15:22 hr.wikipedia.org
  3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka dijagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Uvodnik.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. (5. izd.). Argentina, Uredništvo Panamericana S.A..
  5. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Utjecaj medija kulture pripremljenih s morskom vodom na zdravstvene pokazatelje u morskim vodama lječilišta Chichiriviche, država Falcón, Venezuela. Rev Soc Come Microbiol 2013 33: 122-128
  6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktična klinička mikrobiologija. Sveučilište u Cadizu, drugo izdanje. Služba za publikacije UCA.