Temelj, priprema i uporaba hranjivog agara



hranjivi agar to je neselektivni i ne-diferencijalni kruti medij kulture. U ovom okruženju uzgajaju se sve vrste bakterija koje ne zahtijevaju prehrambeno gledište.

To je jednostavno sredstvo i, unatoč nazivu, sadrži nižu hranjivu vrijednost u usporedbi s drugim sličnim medijima, kao što su agar s infuzijom u mozgu ili tripticaza soja agar.

Njegova korisnost u laboratoriju je vrlo raznolika. Uglavnom se koristi za subkulturu vrsta, održavanje sojeva, brojanje kolonija, kao osnova za pripremu krvnog agara, između ostalog.

Isto tako, zbog svoje svjetlo bež boje, proizvodnja pigmenata generiranih od strane nekih bakterijskih sojeva, kao što je zelenkast pigment Pseudomonas aeruginosa, cigleni crveni pigment kojeg proizvodi Serratia marcescens na sobnoj temperaturi, zlatnožuti pigment Staphylococcus aureus, među ostalima.

Osim toga, to je jedan od najekonomičnijih medija za rast koji se nalaze na tržištu.

indeks

  • 1 Temelj
  • 2 Sastav
  • 3 Priprema
  • 4 Upotreba
    • 4.1. Kao osnova za pripremu krvnog agara
    • 4.2 Stimulirati sporulaciju bakterija koje tvore spore
    • 4.3 Održavanje deformacije
    • 4.4 Brojanje kolonija
    • 4.5 Izvođenje dijagnostičkih testova
    • 4.6 Oporavak mezofilnih aerobnih rekreacijskih slanih voda (Plaže)
  • 5 Reference

temelj

Kao što je već spomenuto, to je vrlo jednostavno sredstvo koje se temelji na pružanju hranjivih tvari za rast bakterija bez ograničenja i bez kompleksnih reakcija za tumačenje..

Kako je medij proziran, idealan je za brojanje kolonija metodom sijanja po dubini.

sastav

Uglavnom se sastoji od ekstrakta mesa ili ekstrakta kvasca, peptona ili digestije želatine pankreasa, agar-agara, natrijevog klorida i destilirane vode..

Ekstrakt mesa ili kvasca i peptona predstavljaju izvore ugljika i esencijalnih minerala (dušik, fosfor i sumpor), koje će bakterije koristiti kao izvor energije i čimbenike rasta..

Isto tako, agar-agar je osnova svih krutih medija za uzgoj, zamjenjujući želatinu, koja je bila prva baza spoja koju je koristio Robert Koch kako bi dao čvrstu konzistenciju u mediju..

Agar je polisaharid sastavljen od galaktoze, galaktomanana, agaroze i agaropectina. Određuje se na 40 ° C i topi se blizu 100 ° C.

Sa svoje strane, natrijev klorid daje medij osmolarnosti potrebnu za razvoj bakterija.

Konačno, voda služi za hidrataciju i otapanje liofiliziranih spojeva. Treba koristiti destiliranu vodu podešenu na neutralni pH. Voda iz slavine ne smije se koristiti jer sadrži kalcij i magnezij koji mogu reagirati s fosfatima u mediju i tvoriti netopive soli.

priprema

Za jednu litru hranjivog agara treba izvagati 31 g dehidriranog medija. Smjese se u fiolu i otopi u litri destilirane vode. Nakon 5 minuta odmora, zagrijte preko izvora topline i miješajte stalno dok ne prokuha 1 ili 2 minute.

Zatim stavite fiolu u autoklav i sterilizirajte na 121 ° C 20 minuta.

Na kraju vremena, uklanja se iz autoklava i poslužuje u sterilnim Petrijevim posudama, koristeći laminarni poklopac protoka ili Bunsenov plamenik..

Ako je Petrijeva posuda za jednokratnu upotrebu (plastična), medij treba biti raspodijeljen kada agar ima temperaturu od približno 50 ° C, kako bi se spriječilo njihovo deformiranje zbog prekomjerne topline..

Ostaviti da se skrutne i pohraniti u držač ploče koji se okrene i staviti u hladnjak na 2-8 ° C do uporabe.

Ploče moraju biti kaljene prije posijanja. Hranjive ploče agara ne smiju se koristiti ako su onečišćene ili dehidrirane.

PH pripremljenog medija treba podesiti na 7,3 ± 0,2.

aplikacije

To je najjednostavniji medij za kulturu koji se koristi u mikrobiološkom laboratoriju. Njegova formulacija izvrsna je za rast nepotrebnih bakterija.

Njegove glavne uporabe objašnjene su u nastavku:

Kao baza za pripremu krvnog agara

Ovaj medij se ponekad koristi kao baza za pripremu krvnog agara, ali to nije najčešće korištena baza.

Stimulira sporulaciju bakterija koje tvore spore

Ovaj medij za kulturu je posebno koristan za stimuliranje sporulacije bakterija koje tvore spore, kao što su Bacillus sp.

Da bi se to postiglo, zasijava se rod roda bacil i inkubira 24 sata na 37 ° C u aerobiozi. Nakon što se kolonije uzgajaju, ploča se podvrgava naprezanju temperaturom, tj. Temperatura peći se povećava na 44 ° C i ostavlja 24 sata više ili se uvodi u hladnjak 24 sata.

Na kraju usjeva, kulture su proširene i obojene s Gram bojom ili Shaeffer-Fulton spornom mrljom. U njima će se promatrati bacili s endosporama (spore unutar bacila) i eksospore (spore izvan bacila)..

Održavanje deformacije

Neki istraživački laboratoriji ili sveučilišni nastavni laboratoriji za održavanje trebaju održavati održive klinički važne bakterije što je duže moguće, kako bi koristili bakterijsku banku (bacteriotheca) za istraživački rad ili za pripremu nastavnih praksi. Studenti će naučiti manipulirati i identificirati te mikroorganizme.

Hranidbeni agar, kao i agar za infuziju mozga u mozgu, može se koristiti u tu svrhu. Agar je pripremljen, izliven u epruvete s bakelitnim poklopcem i nagnut na bazi, tako da se agar skrutne formirajući blok na dnu i kosinu na površini (vrh flaute)..

Svaka epruveta je označena stavljanjem imena bakterija koje će se saditi i datuma. Na oštrici svaka bakterija će biti posađena i inkubirana 24 sata, nakon što se kolonije uzgajaju, epruvete se čuvaju na sobnoj temperaturi..

Bakterioteku treba obnoviti od 1 do 3 mjeseca, kako bi se izbjegla kontaminacija i dehidracija medija i smrt bakterija..

Na taj se način mogu održati samo nezahtjevne bakterije.

Brojanje kolonija

Iako postoje specijalizirana sredstva za brojanje kolonija, kao što je standardni agar za brojanje, u tu svrhu se može koristiti hranjivi agar, bilo zasijavanjem na površinu drigalskom spatulom ili dubinom. Stoga je vrlo koristan u mikrobiološkoj analizi hrane i vode.

Izvođenje dijagnostičkih testova

Budući da se radi o mediju koji ne sadrži krv ili bilo koji drugi aditiv, idealno je uzeti kolonije koje se uzgajaju u ovom mediju da bi se izvršio test katalaze.

Isto tako, zbog njegove bistre boje, naznačeno je da se obavljaju oksidazni testovi izravno na području zasađenog agara, bez interferencije.

Oporavak mezofilnih aerobnih rekreacijskih slanih voda (Plaže)

Hranjivi agar pripremljen s 10% morske vode koristan je za procjenu mezofilnih aerobova u morskim vodama.

Na taj način možemo uvidjeti razinu stvarne kontaminacije koju ove vode imaju s tim mikroorganizmima, jer se u ovoj vrsti uzoraka rezultati preklapaju kada se upotrebljavaju kulture kulture pripremljene na konvencionalan način..

To su pokazali Cortez i sur. 2013. godine u istraživačkom radu.

To se može objasniti zbog naglih promjena koje bakterije prolaze kada prelaze iz hiper-slanog okoliša u okolinu s niskom količinom soli, stoga mikroorganizmi ulaze u stanje letargije u kojoj su održivi, ​​ali se ne mogu kultivirati.

reference

  1. "Hranjivi agar." Wikipedija, slobodna enciklopedija. 13 ruj 2016, 20:33 UTC. 29 Prosinac 2018, 21:04 en.wikipedia.org
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka dijagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Uvodnik.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. (5. izd.). Argentina, Uredništvo Panamericana S.A..
  4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Utjecaj medija kulture pripremljenih s morskom vodom na zdravstvene pokazatelje u morskim vodama lječilišta Chichiriviche, država Falcón, Venezuela. Rev Soc Come Microbiol 2013 33: 122-128
  5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M i Cardoso M. Mikrobiološka kakvoća vode za osjemenjivanje doza, za Suinos.Cient.Agro.Amaz. 2013 1 (2): 42-49.
  6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktična klinička mikrobiologija. Sveučilište u Cadizu, drugo izdanje. Služba za publikacije UCA.