Temelj, priprema i upotreba soli agara i manitola



solni agar i manitol ili slan manitol je kruti, selektivni i diferencijalni medij kulture. Napravio ga je Chapman za izolaciju patogenih Gram pozitivnih koka, osobito Staphylococcus aureus.

Međutim, također je korisno izolirati Staphylococcus epidermidis, koja ponekad može biti prisutna kao oportunistički patogen, i Staphylococcus saprophyticus, Poznat je i kao urinarni patogen, među ostalim vrstama.

Neki Enterococcus mogu rasti u ovom mediju, kao i određeni gram-pozitivni bacili koji tvore spore.

Ovaj medij je vrlo koristan u analizi kliničkih uzoraka, ali se također koristi u mikrobiološkim istraživanjima hrane i kontroli kvalitete industrijskih proizvoda, kao što su kozmetika, lijekovi, među ostalima..

Solani manitolski agar sastoji se od ekstrakta i peptona govedine, triptina, manitola, natrijevog klorida, fenol crvenog i agara.

indeks

  • 1 Temelj
  • 2 Priprema
  • 3 Upotreba
  • 4 Kontrola kvalitete
  • 5 Završna razmatranja
  • 6 Reference

temelj

Manitol agar je selektivan zahvaljujući visokoj koncentraciji soli koju ima. Salinitet djeluje kao inhibitorna tvar i sprječava rast gram-negativnih bakterija.

Također je različit zbog prisutnosti ugljikohidrata manitola i indikatora fenolnog crvenog pH. Od toga, bakterije koje mogu fermentirati manitol proizvode kiseline, zakiseljuju medij, pretvaraju kolonije i srednje žute boje..

S druge strane, kolonije koje ne fermentiraju manitol rastu u mediju uzimajući hranjive tvari dobivene iz ekstrakta i peptonas mesa i tripteína. Odatle bakterije izvlače ugljik, dušik, vitamine i minerale potrebne za njihov rast.

Kolonije u ovom slučaju mogu biti slabe ili jake ružičaste, a medij ostaje iste boje ili se mijenja u fuksiji.

Agar je tvar koja osigurava konzistentnost medija.

priprema

Za pripravu jedne litre slanog manitolnog agara izvagano je 111 g dehidriranog medija komercijalne pretežne kuće i otopljeno u 1000 ml destilirane vode, koristeći fiolu.

Toplina se primjenjuje tako da se često uklanja medij za poboljšanje procesa otapanja. Neka prokuha minutu.

Fiola se stavi u autoklav na 121 ° C tijekom 15 minuta.

Na kraju vremena, fiola se izvadi iz autoklava, ostavi stajati i poslužuje se između 15 i 20 ml na sterilnim Petrijevim posudama kada je temperatura približno 50 do 55 ° C..

Dopušteno je da se stvrdne, naručiti u obrnutom obliku u plaketu i držati u hladnjaku do njegove uporabe. Prije sadnje uzorka, morate pričekati da ploča uzme temperaturu okoline.

Ploče su posijane trakom ili sijanjem na površinu drigalskom špatulom. Konačni pH pripremljenog medija treba biti 7,4 ± 0,2

Boja dehidriranog medija je svijetlo bež, a boja pripremljenog medija je narančastocrvena.

aplikacije

Zbog svoje visoke selektivnosti, ovaj medij je idealan za sadnju uzoraka s mješovitom florom u kojoj se želi tražiti prisutnost Staphylococcus aureus, kao glavni patogen ovog roda.

U tom smislu, jedna od najčešćih primjena je u mikrobiološkoj analizi uzoraka izlučivanja ždrijela i nazalnog iscjedka, posebice za otkrivanje asimptomatskih prijenosnika S. aureus.

Neke zemlje provode ovu analizu kao obvezni zahtjev za ljude koji žele raditi kao dobavljači hrane.

Ova kontrola sprječava zapošljavanje ljudi koji su nositelji S. aureus, time izbjegavajući masovno trovanje hranom, zbog konzumacije hrane kontaminirane stafilokoknim enterotoksinom.

Također se može uključiti u sijanje rana, krvnih kultura, CSF-a, bronhoalveolarnog ispiranja, između ostalih..

Solirani manitol agar je koristan za ponovno izoliranje kolonija urinskih kultura iz CLED agara ili krvnog agara čija je Gram otkrio Gram-pozitivne koke u klasterima..

To vrijedi i za mikrobiološku analizu hrane, pitke vode, tla, između ostalih primjena.

Kontrola kvalitete

Jednom kada se pripremi šarža ploča s usoljenim manitolnim aganom, preporučljivo je provesti kontrolu kvalitete. Kontrolni sojevi su posijani da bi se pokazalo da li postoji rast ili ne.

Kao pozitivna kontrola, poznati sojevi Staphylococcus aureus. Ona mora zadovoljavajuće rasti razvijanjem žutih kolonija, a medij također postaje iste boje.

Isto tako, prikladno je uključiti poznati soj Staphylococcus epidermidis. Mora rasti zadovoljavajuće razvijajući ružičaste kolonije, a medij ostaje iste boje ili potamni u jačoj ružičastoj boji.

Kao negativna kontrola koriste se sojevi koji ne bi smjeli rasti u ovom mediju. Na primjer, možete zasaditi poznati soj Escherichia coli ili Klebsiella pneumoniae. Očekivani rezultat je potpuna inhibicija, tj. Nikakav rast.

Dodatno, ploču bez inokulacije treba inkubirati. U njemu ne bi trebalo biti rasta, nema promjene boje.

Važno je da se ploča ne koristi ako postoje naznake pogoršanja, kao što su onečišćenje, dehidracija, obezbojenje, među ostalima..

Završna razmatranja

Kada se upotrebljava soljeni agens za manitol, moraju se uzeti u obzir neki važni aspekti:

-Dobivanje rasta žutih kolonija ne znači da je to Staphylococcus aureus. Mora se imati na umu da su neki sojevi Enterococcusa sposobni rasti u ovom mediju i fermentirati manitol, kao i određene Gram-pozitivne spore-formirajuće bacile..

Stoga je važno izvršiti Gram u koloniji i test katalaze.

-S druge strane, mora se smatrati da se druge vrste stafilokoka razlikuju od drugih vrsta aureus Također su sposobni za fermentaciju manitola. Zbog toga je važno podgojiti koloniju do hranjivog bujona za uzimanje i izvršiti test koagulaze.

Među Staphylococcus vrstama koje su klinički važne za muškarce fermentira manitol su: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, među ostalima.

Drugi mogu dati varijabilnu reakciju, to jest, ponekad pozitivnu, a ponekad i negativnu. Neki su S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, među ostalima.

-Ne preporučuje se uzimati kolonije izravno iz manitolnog agara radi provođenja koagulaznog testa, budući da visoka koncentracija soli u mediju može utjecati na rezultat.

-Konačno, preporučuje se inkubirati ploče koje su zasađene slanim manitolom do 48 sati, s obzirom na činjenicu da neki sojevi S. aureus Oni mogu polako fermentirati manitol, iako to nije često.

reference

  1. Laboratories Britania. Manitol slanog agara. 2015. Dostupno na: britanialab.com
  2. "Slan Manitol Agar". Wikipedija, slobodna enciklopedija. 31. listopada 2018. u 19:08 UTC. 17 sij 2019, 20:55, dostupno na: en.wikipedia.org.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. (5. izd.). Argentina, Uredništvo Panamericana S.A..
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka dijagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Uvodnik
  5. BD Laboratories BD Mannitol Salt Agar. 2013. Dostupno na: bd.com.