Soja agar tripticaseína temelj, priprema i koristi

triptikasein sojin agar ili sojin agar triptikaze je kruti, neselektivni i hranjivi medij kulture. Označena je s slovima TSA za akronim u engleskom Trypticase Soy Agar. Sastoji se od tripeina, sojinog peptona, natrijevog klorida i agar-agara.

Zbog svoje visoke nutritivne snage idealna je za uzgoj umjereno zahtjevnih i nezahtjevnih mikroorganizama. Medij bez dodatnih dodataka se ne preporučuje za primarne kulture, ali je vrlo koristan za subkultiviranje čistih sojeva i održavanje njihove održivosti, između ostalog.

Također, ovaj agar služi kao osnova za pripravu obogaćenih medija kao što je krvni agar, posebno kada je potrebno promatrati obrasce hemolize i montirati svojte optokvina i bacitracina, potrebne u dijagnostici Streptococcus pneumoniae i Streptococcus pyogenes odnosno.

S druge strane, u kombinaciji s antibioticima korisno je izolirati fakultativne i stroge anaerobne mikroorganizme od kliničkog značaja iz uzoraka s miješanom florom..

Konačno, sastav triptikasein sojinog agara i njegova svojstva zadovoljavaju zahtjeve koje postavljaju različite farmakopeje (europska, japanska i sjevernoamerička).

indeks

• 1 Temelj
• 2 Priprema
  • 2.1 Ploče agar s triptikasein sojom
  • 2.2. Plitice agar s triptikasein sojom uz dodatak krvi
  • 2.3. Tripticasein soja agar ploče nadopunjene zagrijane krvi
  • 2.4 Klinovi triptikasein sojinog agara
• 3 Upotreba
• 4 Razmnoženo
• 5 Kontrola kvalitete
  • 5.1 Kontrola sterilnosti
  • 5.2 Kontrola rasta
  • 5.3. Kontrola rasta i obrasca hemolize sojinog agara triptikaseina dopunjenog krvlju
• 6 Reference

temelj

Za pravilan razvoj bakterija potrebno je prisustvo energetskih doprinosa, kao što su aminokiseline, vitamini, purinske baze i pirimidni.

U tom smislu, triptein i sojin pepton daju te hranjive tvari mikroorganizmima, što im omogućuje potpuni razvoj. Međutim, za zahtjevne bakterije potrebno je ovaj agar dopuniti defibriniranom krvi ili grijanom krvlju kako bi se povećalo obogaćenje.

S druge strane, ako se antibiotici dodaju mediju, on postaje selektivni medij. Također možete dodati 0,6% ekstrakta kvasca u korist izolacije vrsta roda Listeria, uz dodavanje cistinskog telurita i Jagnjeća krv je idealna za Corynebacterium diphteriae.

Konačno, natrijev klorid daje osmotsku ravnotežu mediju, a agar daje čvrstu konzistenciju.

priprema

Ploče agar agar tripticaseina

Da bi se pripravio agar iz triptikasein soje, 40 grama dehidriranog komercijalnog medija treba odmjeriti na digitalnoj skali. Otapa se u litri destilirane vode sadržane u fioli.

Smjesa se ostavi stajati 5 minuta i zatim se dovodi do izvora topline da se pomogne u otapanju medija. Često je treba miješati i ostaviti kuhati 1 ili 2 minute. Zatim se medij sterilizira u autoklavu na 121 ° C 15 minuta.

Ostaviti da se ohladi na 50 ° C i rasporediti u sterilne Petrijeve posude. Neka se stvrdne, preokrene, naruči u plakete i pohrani u hladnjak.

Krajnji pH medija treba biti 7,3 ± 0,2.

Trebalo bi uzeti u obzir da je boja dehidriranog medija kulture svijetlo bež i treba biti pohranjena na temperaturi od 10 do 35 ° C, na suhom mjestu..

Sa svoje strane, agar pripremljen je svijetlo jantar. Pripremljene ploče treba čuvati u hladnjaku (2 do 8 ° C) do uporabe.

Ploče moraju prije upotrebe doseći sobnu temperaturu.

Ploče soja agar tripticaseina nadopunjene krvlju

Krvni agar je pripravljen dodavanjem 5% defibrinirane krvi u vrijeme hlađenja agarima soje triptikaseina na 50 ° C. Smjesa se homogenizira rotiranjem s blagim pokretima.

Poslužite u sterilnim Petrijevim posudama. Boja medija bi trebala biti trešnja crvena.

Ploče agar s tripticasein sojom nadopunjene zagrijanom krvlju

Da bi se pripremio krvni agar na bazi TSA, gore opisani postupci su isti, ali kada se napusti autoklav ostavi se stajati dok temperatura medija ne bude približno između 56 i 70 ° C. U to vrijeme krv je smještena i miješana sve dok medij ne postane smeđa.

Poslužite u sterilnim Petrijevim posudama. Boja medija je čokoladno smeđa.

Klinovi od triptikasein sojinog agara

Postupak za pripremu agara je isti kao i za ploče, s tom razlikom što se umjesto posluživanja medija na Petrijevim posudama raspodjeljuje između 10 i 12 ml u epruvete s bakelitnim poklopcem prije sterilizacije..

Zatim se epruvete autoklaviraju na 121 ° C tijekom 15 minuta. Kad odlaze, oslanjaju se uz pomoć potpore i dopuštaju da se stvrdnu.

Pripremljeni klinovi se sijaju po površini i služe za održavanje određenih nezahtjevnih živih mikroorganizama, za određeno vrijeme.

aplikacije

Tripticasein soja agar koristi se u sljedećim slučajevima:

-Kao baza za pripremu klasičnog krvnog agara koji se rutinski koristi u većini laboratorija.

-Izolacija zahtjevnih bakterija.

-Promatranje uzorka hemolize.

-Izvođenje dijagnostičkih testova.

-Kao temelj za pripremu specijalnog krvnog agara Corynebacterium diphteriae, s telurnim cistinom i janjetina krv.

-Kao osnova za pripremu janjećeg krvnog agara, više kanamicin-vankomicina za rast anaeroba, posebno Bacteroides sp.

-Za održavanje nezahtjevnih sojeva (Bacterioteca).

-Broj mikroba u aerobnoj analizi u mikrobnoj studiji vode, okoliša, hrane i kozmetičkih uzoraka.

zasađen

Uzorci se mogu posađivati ​​izravno na površinu sojinog agara triptikaseina nadopunjenog krvlju ili drugim aditivima. Sije se iscrpljenjem.

Budući da se ploče agar s triptikasein sojom bez aditiva općenito koriste za subkulturu mikrobnih sojeva (bakterije ili kvasci).

Kontrola kvalitete

Kontrola sterilnosti

Da bi se provjerila sterilnost različitih medija pripremljenih s agensom za sojin triptikasein, preporuča se sljedeće: iz svake pripremljene šarže, jednu ili dvije ploče ili epruvete treba inkubirati bez inokulacije na 37 ° C tijekom 24 sata da se pokaže sterilnost. U svim slučajevima mora ostati bez rasta.

Ako se pronađe kontaminacija, cijela se pošiljka mora odbaciti.

Kontrola rasta

Za proučavanje pravilnog funkcioniranja triptikasein sojinog agara mogu se koristiti sljedeći bakterijski sojevi: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 i Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Sojevi su zasijani i inkubirani u aerobiozi na 37 ° C tijekom 24 sata.

U svim slučajevima rast mora biti zadovoljavajući.

Također možete koristiti gljive kao kompleks Candida albicans ATCC 10231 i Aspergillus niger ATCC 16404. Očekuje se dobar rast za oba soja.

Kontrola rasta i uzorak hemolize sojinog agara triptikaseina dopunjen krvlju

Da bi se provjerilo ispravno funkcioniranje krvnog agara pripremljenog s ovom bazom, mogu se koristiti sljedeći sojevi: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 i Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Sijaju se i inkubiraju na 37 ° C u mikroaerophilicusu tijekom 24 sata.

U svim slučajevima rast mora biti zadovoljavajući, uzimajući u obzir to u S. pyogenes beta-hemoliza (bistar halo oko kolonije) i u oba soja S. pneumoniae alfa hemoliza (zelenkasta aureola oko kolonija).

reference

1. Doprinositelji Wikipedije. Triptikaza Ja sam agar. Wikipedija, slobodna enciklopedija. 17. prosinca 2018. u 15:47 UTC. Dostupno na: https://en.wikipedia.org
2. Laboratories Britania. Tetinski sojin agar. 2015. Dostupno na: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Triptih soje. Dostupno na: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka dijagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Uvodnik.
5. BD Laboratories Trypticase Ja sam Agar. 2014. Dostupno na: .bd.com