Agar TCBS temelj, priprema i uporaba



TCBS agar je visoko selektivni i diferencijalni kruti medij kulture, koji se koristi za izolaciju i kulturu Vibrio bakterija, posebno Vibrio cholerae, V. vulnificus i V. parahaemolyticus kao glavni uzročnici ovog roda.

Akronim TCBS znači tiosulfat citratni žuč sukroza. Ovaj agar je također poznat kao selektivni medij za Vibrios. Izvornu formulu izradio je Nakanishi, a kasnije ga je modificirao Kobayashi.

Sastavljen je od ekstrakta kvasca, mesnog peptona, tripteina, natrij citrata, natrijevog tiosulfata, vola žuči, saharoze, natrijevog klorida, željezovog citrata, bromotimol plavog, timol plavog i agara.

Ovaj sastav dopušta adekvatan razvoj vrsta Vibrio iz uzoraka vode, fecesa i hrane; osim za Vibrio hollisae, koja ne raste u ovom mediju. Osim toga, TCBS medij je sposoban inhibirati rast drugih pratećih bakterija, posebno koliforma.

Zbog teških gastrointestinalnih i ekstra-intestinalnih problema koje neke vrste roda Vibrio proizvode, njihova je dijagnoza vrlo važna. Čovjek je inficiran uglavnom konzumiranjem sirove ili nedovoljno kuhane morske hrane ili kontaminirane vode, ali i infekcijom rana..

Zbog toga bi klinički laboratoriji trebali uključiti TCBS agar u proučavanje kulture stolice tekućih uzoraka stolice, posebno s pojavom vode riže. Pogotovo ako pacijent prijavi da je bio u kontaktu s morskom vodom ili da je konzumirao plodove mora ili ribu.

indeks

  • 1 Temelj
  • 2 Priprema
  • 3 Upotrijebite
  • 4 Razmnoženo
  • 5 Ograničenje
  • 6 Kontrola kvalitete
  • 7 Reference

temelj

Ekstrakt kvasca, mesni peptoni, i triptein su nutritivni izvor ovog medija. Međutim, TCBS agar je negostoljubivi medij za većinu bakterija.

Njegova visoka selektivnost daje se dodavanjem natrijevog citrata i vola žuči; oba su inhibitorska sredstva koja također osiguravaju alkalni pH u mediju, ograničavajući rast prateće flore i favorizirajući rast V. cholerae, među ostalim vrstama. Treba napomenuti da Vibrio cholerae je vrlo osjetljiva na žgaravicu.

Sa svoje strane, natrijev klorid balansira osmotski na medij. Osim toga, kako je njegova koncentracija visoka, ona također djeluje kao inhibirajuće sredstvo, pogodujući rastu halofilnih bakterija.

Saharoza je fermentabilni šećer koji zajedno s plavim pH pokazateljima bromotimola i timol plavog daju diferencijalni karakter mediju. Iz tog razloga, na taj način je moguće razlikovati sojeve fermentacije saharozom od ne-fermentirajućih sojeva.

Kolonije sojeva fermentacije saharoze razvijaju žutu boju i pretvaraju medij od zelene u žutu zbog proizvodnje kiselina. Ne fermentori postaju prozirni, a medij ostaje izvorna boja (zelena).

Isto tako, ovaj medij sadrži natrijev tiosulfat kao izvor sumpora i feri-citrat kao sredstvo za otkrivanje. Obje pokazuju bakterije koje mogu proizvesti vodikov sulfid (bezbojni plin). H2S nastaje iz tiosulfata, a kasnije reagiranjem s željezovim citratom formira se vidljivi crni talog.

Konačno, agar je ono što daje čvrstu konzistenciju mediju.

priprema

Izvaže se 89 g dehidriranog medija i otopi u jednoj litri destilirane vode. Pomoć pri otapanju zagrijavanjem i čestim miješanjem. Smjesa se može kuhati 2 minute.

Ovaj medij ne autoklavira. Nakon otapanja, poslužuje se izravno na sterilnim pločama. Kada se učvrste, raspoređuju se na obrnut način u plakete i čuvaju u hladnjaku (2-8 ° C) dok se ne upotrijebe.

Medij nakon pripreme treba biti na pH 8,6 ± 0,2.

Boja dehidriranog medija je svijetlo bež ili zelenkasto-bež, a boja medija je šumski zelena ili plavičasto zelena.

Važno je ostaviti paljenje ploča prije sijanja uzoraka.

upotreba

Najčešći uzorak za izolaciju Vibriosa je proljev.

Uzorci stolice, ako se ne mogu odmah zasaditi na selektivnom mediju, moraju se transportirati usred Cary Blaira.

Da bi se povećala osjetljivost kulture, feces se može propuštati kroz peptonsku vodu pri pH 8,4 kao sredstvo za obogaćivanje maksimalno 8 sati, od tamo se gaji u TCBS medij..

Također treba imati na umu da neki sojevi Vibriosa mogu uzrokovati septikemiju kod imunosupresiranih pacijenata, tako da se mogu izolirati iz krvnih kultura. Isto tako, uzorci vode i hrane iz mora mogu se analizirati kada se pojave epidemije epidemija kolere.

zasađen

Inokulum ispitivanog uzorka mora biti istaknut, sjetva se provodi metodom crtanja iscrpljenjem. Ploče se inkubiraju 24 sata pri 37 ° C u aerobiozi.

Vjerojatne kolonije u Vibrio cholerae Srednje su veličine, glatke, neprozirne, tankih rubova i žute zbog fermentacije saharoze..

Na sličan način, vrsta V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii i neke V. vulnificus. Ostale vrste Vibriona klinički su važne kao V. parahaemolyticus ne fermentirati saharozu, razvijajući se kao maslinove zelene kolonije.

S druge strane, moramo imati na umu da neki sojevi Aeromonas i Plesiomonas koji su oksidaza (+) mogu rasti u ovom mediju, razvijajući žute kolonije koje mogu zbuniti kliničara. Dok neki sojevi Pseudomonas također oksidaze (+) rastu kao zelene kolonije kao i V. parahaemolyticus.

ograničenje

Test oksidaze koji je pozitivan na rod Vibrio nikada se ne smije izvoditi iz kolonija dobivenih iz TCBS agara, jer će dobiveni rezultat biti lažno negativan. Spojevi u mediju jako utječu na ovaj test. Dakle, to bi trebalo biti učinjeno od subkultura na krvnom agaru.

Kontrola kvalitete

Da bi se dokazalo da je medij u dobrom stanju, preporučljivo je posaditi poznate ili certificirane kontrolne sojeve i promatrati ako rast zadovoljava očekivane karakteristike.

Za to, naprezanja:

-Vibrio cholerae - Zadovoljavajući rast (žute kolonije, prozirne granice).

-Vibrio parahaemolyticus - Zadovoljavajući rast (kolonija sa zelenim centrom i prozirnom granicom).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - zadovoljavajući rast (žute kolonije s oreolima iste boje oko kolonije).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - potpuna ili djelomična inhibicija (male žute ili prozirne kolonije).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 - djelomična ili potpuna inhibicija (plave kolonije).

-Escherichia coli ATCC 25922 - Potpuno inhibiran.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Potpuna ili djelomična inhibicija. (Centar malih kolonija zelenog prozirnog ruba).

Inkubacija neinokuliranog medija ne smije se mijenjati.

reference

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. TCBS agar. 2009. Dostupno na: f-soria.es
  2. Laboratorij BD. BD. TCBS Agar 2003. Dostupno na: bd.com
  3. Laboratories Britania. TCBS medij. 2015. Dostupno na: britanialab.com
  4. Acumedia Laboratories TCBS agar. 2016. Dostupno na: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka dijagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. 5. izd. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.