Agar Thayer Martin temelj, priprema i uporaba



Agar Thayer Martin To je vrlo hranjiva i selektivna kruta tvar za izolaciju Neisseria meningitidis i Neisseria gonorrhoeae; poznati su kao patogeni ili klinički važni Neisseria.

Jedna od najvažnijih posebnosti Thayer Martin agara je njegov visoki sadržaj prehrambenih dodataka. Ovo svojstvo je neophodno, jer su Neisserias vrlo zahtjevni mikroorganizmi sa stajališta prehrane i stoga ne rastu u uobičajenim medijima..

S druge strane, budući da se ti mikroorganizmi normalno nalaze u nesterilnim područjima, dodavanje inhibitora koji ometa rast prateće flore je potrebno, bez utjecaja na razvoj roda Neisseria..

Ovaj agar se sastoji od GC baznog agara, hemoglobina, dodatnih prehrambenih dodataka i kompleksa inhibitornih tvari (antibiotika i antifungala). Komercijalne kuće prodaju svaki od dodataka zasebno.

Uzorak koji se sadi u ovom mediju ovisit će o traženom mikroorganizmu. u Neisseria gonorrhoeae Idealni uzorci su vaginalni i uretralni sekret. Dok za Neisseria meningitidis najčešće korišteni uzorci su CSF, faringealni i nazofaringealni eksudati.

indeks

  • 1 Temelj
    • 1,1 GC bazni agar
    • 1.2 Hemoglobin
    • 1.3 Dopuna za obogaćivanje
    • 1.4 Inhibitori
  • 2 Priprema
    • 2.1 Originalni Thayer Martin Agar
    • 2.2 Agar Thayer Martin modificiran
  • 3 Upotrijebite
  • 4 Kontrola kvalitete
  • 5 Ograničenja
  • 6 Reference

temelj

Neisserias su mikroorganizmi klasificirani kao dosadni i stoga je njihova izolacija teška. Zbog toga je Thayer Martín složeni medij i svaka njegova komponenta ispunjava funkciju koja je objašnjena u nastavku:

GC jezgra agar

GC agar sadrži proteozni pepton, kukuruzni škrob, natrijev klorid, dikalij fosfat, monokalijev fosfat i agar-agar. Njegove komponente osiguravaju osnovne hranjive tvari za razvoj mikroba, neutraliziraju toksične masne kiseline, doprinose održavanju osmotske ravnoteže, definiraju pH i osiguravaju čvrstu konzistenciju okoliša.

hemoglobin

Hemoglobin osigurava faktore V i X (nikotinamid adenin dinukleotid NAD i hemin). Stoga u takvom okruženju rastu i vrste Haemophilus. Hemoglobin se može komercijalno dobiti u dehidriranom obliku ili se može dodati svježa defibrinirana krv goveda..

Dopuna za obogaćivanje

S druge strane, dodatak za obogaćivanje mora biti dodan Thayer-Martinovom mediju, jer hranjive tvari sadržane u baznom agaru nisu dovoljne za zahtjeve roda Neisseria..

Najčešće korišteni dodatak za obogaćivanje naziva se isovitalex. Sadrži glutamin, adenin, NAD, kokarboksilazu, gvanin, feri-nitrat, p-amino benzojevu kiselinu, vitamin B12, tiamin i glukozu. Svi ovi spojevi neophodni su za pravilan razvoj patogene Neisseria.

inhibitori

Budući da se radi o vrlo hranjivom mediju, inhibitori se moraju upotrijebiti kako bi se spriječio rast mikroorganizama uobičajene flore tog područja i time favorizirala izolacija roda Neisseria..

Kompleks inhibitora sastoji se od vankomicina, kolistina i nistatina. Vankomicin inhibira rast gram-pozitivnih bakterija, kolistin sprječava razvoj gram-negativnih bakterija kao što su Pseudomonas i neke saprofitske Neisseria, a nistatin djeluje na kvasce kao Candida albicans.

Međutim, zatim je Thayer Martin agar modificiran; promjene su se sastojale od dodavanja trimetoprima, povećanja količine agara i dodatka dodatne glukoze. Ove promjene značajno su poboljšale oporavak vrsta Neisseria gonorrhoeae.

Valja napomenuti da trimetoprim inhibira rast roda Proteus i njegovo posljedično stvaranje rojeva. U tom smislu, antibiotici su ono što daje selektivnu prirodu mediju Thayer Martinu.

priprema

Izvorni Thayer Martin Agar

-GC Agar

Izvagati 8,2 g dehidriranog GC medija i suspendirati u 100 ml. Pomiješati i prokuhati 1 minutu uz često miješanje kako bi se otopila u cijelosti. Smjesa se sterilizira u autoklavu na 121 ° C tijekom 15 minuta.

-2% hemoglobina

Suspendirati 2 g dehidriranog hemoglobina u 2 ili 3 ml vruće destilirane vode kako bi se dobila jednolična smjesa. Dodajte malo po malo vode da biste popunili volumen od 100 ml. Suspenzija mora biti homogena prije sterilizacije.

Sterilizirajte u autoklavu 15 minuta.

-Dopuna za obogaćivanje

Rekonstituirajte komercijalni put s razrjeđivačem koje daje ista trgovačka kuća. Dobro izmiješajte. Količina sredstva za razrjeđivanje koja će se koristiti bit će specificirana u uputama za kit..

-Dodatak inhibicije V.C.N (vankomicin, kolistin, nistatin)

Rekonstituirajte bočicu s razrjeđivačem koje daje komercijalna kuća. Dobro izmiješajte. Količina sredstva za razrjeđivanje koja će se koristiti bit će specificirana u uputama za kit..

-pripremljen

Za svakih 100 ml GC agara postupite kako slijedi:

Kada GC agar napusti autoklav, neka se ohladi na temperaturu od približno 50 ° C i doda 2 ml pripremljene otopine hemoglobina, 2 ml dodatka za obogaćivanje (isobitalex ili britalex) i 2 ml dodatka za inhibiciju. Izmiješati i poslužiti u sterilnim Petrijevim posudama.

Pustiti da se skrutne i čuvati u hladnjaku do upotrebe.

Boja pripremljenog medija je trešnja crvena. Krajnji pH medija je 7.2 ± 0.2

Modificirani agar Thayer Martin

Izvagati 8,2 g dehidriranog GC medija i suspendirati u 100 ml. Dodati 1 g agara i dodati 0,3 g glukoze. Pomiješati i prokuhati 1 minutu uz često miješanje kako bi se otopila u cijelosti. Smjesa se sterilizira u autoklavu na 121 ° C tijekom 15 minuta.

Pripremite hemoglobin i dodatak za obogaćivanje kako je gore opisano.

Dodatak inhibicije je V.C.N.T (vankomicin, kolistin, nistatin, trimetoprim).

-pripremljen

Nastavite kako je opisano za originalni Thayer Martin agar.

upotreba

Tayer Martin agar treba popuštati prije sijanja uzoraka. Uobičajeno korišteni uzorci su faringealni eksudati, nazalni eksudati, vaginalna, uretralna i / ili rektalna sekrecija i CSF..

Koristite svježe uzete uzorke i napravite jak inokul na agaru. Uzorci se sijaju izravno odvodom materijala, a zatim ispuštaju na površinu.

Ploče se inkubiraju na 35-37 ° C tijekom 24 do 48 sati u mikroaerofilnoj posudi (5% CO2). Na kraju perioda inkubacije, ploče se ispituju za male, sive i ponekad kolonije slične mukoidu..

Izvršite Gram i potvrdne biokemijske testove na sumnjive kolonije.

Kontrola kvalitete

Za provođenje kontrole kvalitete Thayer Martin agara mogu se koristiti sljedeći mikrobni sojevi.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 i Neisseria meningitidis ATCC 13090; u oba soja očekuje se zadovoljavajući razvoj.

Sljedeći sojevi također trebaju biti uključeni: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 i Candida albicans ATCC 10231. U svim njima se očekuje potpuno ili djelomično inhibiranje u ovom mediju.

ograničenja

-Treba imati na umu da bakterije koje su otporne na korištene inhibitore mogu rasti u mediju..

-Postoje sojevi Neisseria gonorrhoeae koji mogu biti osjetljivi na koncentraciju upotrijebljenog vankomicina. Zbog toga se preporuča paralelno koristiti čokoladni agar s dodatkom isovitalexa, ali bez inhibitora.

-Postoje sojevi kvasaca rezistentni na nistatin koji mogu rasti u ovom mediju i ometati izolaciju patogenih Neisseria, osobito gonokoka..

reference

  1. Valtek dijagnostički laboratoriji. Agar Thayer-Martin.2016. Dostupno u: com
  2. Laboratories Britania. Thayer Martin Modificirani medij. 2010. Dostupno na: britanialab.com
  3. Doprinositelji Wikipedije. Thayer-Martin agar. Wikipedija, slobodna enciklopedija. 26. listopada 2017., 16:33 UTC. Dostupno na: wikipedia.org4. Pristupljeno 28. veljače 2019.
  4. Laboratories Britania. GC agar. 2010. Dostupno na: britanialab.com.
  5. Laboratoriji BBL Medium obogaćivanje za zahtjevne mikroorganizme. 1999. Dostupno na: bd.com
  6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka dijagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.