Temelj, priprema i uporaba Agar TSI-ja



TSI agar ili trostruki šećerni agar željeza je kruti medij kulture koji služi kao biokemijski test za vođenje početne identifikacije gram negativnih bacila. Temelji se na dokazivanju fermentacije prisutnih šećera i proizvodnji sumporovodika i plina.

Njezin sastav i podloga vrlo je sličan Kliglerovom testu željeza, s tom razlikom što potonji sadrži samo glukozu i laktozu. Umjesto toga, kao što ime implicira, trostruko željezo sadrži tri fermentirajuća ugljikohidrata: glukozu, laktozu i saharozu..

Osim toga, TSI medij ima četiri proteinska derivata koji ga čine vrlo hranjivim agrom: ekstrakt kvasca, mesni ekstrakt, pepton i proteozni pepton. Sadrži i željezni amonijev sulfat, natrijev tiosulfat, natrijev klorid, fenol crveni i agar.

Nesposobnost mikroorganizma da fermentira prisutnu glukozu u mediju odmah ga isključuje iz obitelji Enterobacteriaceae. Stoga je ovaj test bitan za odlučivanje o tome koji put identifikacije treba uzeti za određivanje roda i vrsta.

Svaki laboratorij odlučuje radi li se o TSI agaru ili Kligler agar agaru.

indeks

  • 1 Temelj
    • 1.1 Natrijev klorid i agar
    • 1.2 pH indikator (fenolno crveno)
    • 1.3 Derivati ​​proteina (ekstrakt kvasca, ekstrakt mesa, pepton i proteozni pepton)
    • 1.4. Fermentacija ugljikohidrata (glukoze, laktoze i saharoze)
    • 1.5 Proizvodnja plina
    • 1.6 Natrijev tiosulfat i željezni amonijev sulfat (proizvodnja sumporovodika)
  • 2 Priprema
  • 3 Upotreba
  • 4 Razmnoženo
  • 5 Ograničenja
  • 6 Reference

temelj

Svaki od spojeva ispunjava funkciju unutar medija.

Natrijev klorid i agar

Natrijev klorid je neophodan za održavanje osmotske ravnoteže medija. Dok agar daje čvrstu konzistenciju.

PH indikator (fenolno crveno)

PH pripremljenog medija je uravnotežen na 7,3, a pH indikator (fenol crveni) postaje žut ispod 6,8. To znači da će male količine kiseline proizvedene fermentacijom šećera pretvoriti medij iz crveno-narančaste u žute.

Ako se ne dogodi fermentacija, doći će do alkalizacije medija uporabom peptona, pretvarajući se iz crveno-narančaste u jaku crvenu.

Derivati ​​proteina (ekstrakt kvasca, ekstrakt mesa, pepton i proteozni pepton)

Kada bakterije metaboliziraju bjelančevine prisutne u TSI agaru, proizvode se amini koji alkaliziraju medij (uglavnom na razini konusa), jer reakcija treba kisik. Amini okreću masku na jako crveno.

Ali to će ovisiti o sposobnosti bakterija da fermentiraju ugljikohidrate ili ne.

Fermentacija ugljikohidrata (glukoze, laktoze i saharoze)

Proučavanje fermentacije šećera može dati nekoliko slika i svaka se različito interpretira. Tumačenje testa dijeli mikroorganizme u 3 kategorije: fermentori bez glukoze, fermentori bez laktoze i fermentori laktoze / saharoze..

Treba napomenuti da je količina glukoze u mediju ograničena, dok je koncentracija laktoze i saharoze 10 puta veća..

Bakterija iz obitelji Enterobacteriaceae i drugih mikroorganizama koji fermentiraju glukozu će početi fermentirati ovaj šećer jer je to najjednostavniji ugljikohidrat za energiju..

S druge strane, laktoza i saharoza su složeni ugljikohidrati koji se moraju razgraditi i pretvoriti u glukozu kako bi mogli ući u ciklus Embden-Meyerhof.

-Ne-fermentirajući mikroorganizmi glukoze

Kada inokulirani mikroorganizam ne može fermentirati glukozu, mnogo manje može fermentirati druge ugljikohidrate. Stoga se ovdje ne stvaraju kiseline, ali nastaje amin u kosini zbog uporabe peptona.

U ovom slučaju, kosina postaje jača crvena, a dno cijevi može ostati nepromijenjeno ili se može alkalizirati, ostavljajući cijelu crvenu cijev.

Tumačenje: K / K znači alkalna kosina / alkalna ili neutralna pozadina

Na slici koja je na početku članka vidi sliku cijevi D.

Ovaj rezultat ukazuje da mikroorganizam ne pripada obitelji Enterobacteriaceae.

-Ne-fermentirajući mikroorganizmi laktoze / saharoze

Ako bakterije mogu fermentirati glukozu, ali ne i laktozu ili saharozu, dogodit će se sljedeće:

Bakterija će konzumirati svu prisutnu glukozu nakon otprilike 6 do 8 sati, jer će moći zakiseliti i kosu i taco; to jest, agar će u potpunosti postati žut. Ali kada se glukoza iscrpi i nemoguće koristiti laktozu i saharozu, bakterije će započeti metabolizam proteina.

Ova reakcija treba kisik, stoga se degradacija peptona događa na površini (kosi). Amini proizvode alkalizirajuću masku okretanjem žute do crvene boje. Ova reakcija je dokazana u 18 do 24 sata inkubacije.

Tumačenje: K / A znači alkalni kos i kiseli taco.

Na slici koja je na početku članka vidi sliku cijevi B.

-Mikroorganizmi koji fermentiraju laktozu / saharozu

Očito, mikroorganizmi koji mogu fermentirati laktozu i saharozu mogu fermentirati glukozu. Nakon što se iscrpi minimalna količina glukoze prisutne u mediju, nastali piruvat počinje se metabolizirati i formirati kiseline kroz aerobni ciklus Krebsa, au razdoblju od 8 do 12 sati sav će medij biti žut.

Ako je bakterija sposobna za cijepanje laktoze ili saharoze, nastavljaju se proizvoditi kiseline, a nakon 18 do 24 sata cijela cjevčica - kljun i taco - ostaje žuta.

Treba napomenuti da se uporaba glukoze vrši na dva načina: jedan u aerobnom obliku u kosini cijevi, a drugi anaerobno na dnu cijevi..

Tumačenje: A / A znači kiselo koso / kiselinsko dno. Može predstaviti plin ili ne.

Na slici koja je na početku članka vidi sliku cijevi A.

Proizvodnja plina

Neki mikroorganizmi mogu proizvoditi plin tijekom fermentacije šećera. Plin se u cijevi očitava tlakom koji djeluje unutar agara. Tlak uzrokuje stvaranje mjehurića ili pomicanje agara. Ponekad stvaranje plina može razbiti medij.

Važno je da se u vrijeme zasijavanja TSI-ja bušenje vrši čistim središtem agara sve dok ne dosegne dno. Ako se pukotina preusmjeri prema zidovima cijevi, to može uzrokovati lažne pozitivne rezultate u proizvodnji plina, jer će pobjeći kroz pogrešno oblikovan kanal.

Proizvodnja plina, kao i reakcije koje se događaju u kosom agaru, zahtijevaju kisik, stoga se preporuča da se cijev prekrije pamučnim čepom, a ako se koristi bakelitni poklopac, on se ne smije u potpunosti prilagoditi..

Proizvodnja plina iskazana je kao pozitivna (+) ili negativna (-).

Natrijev tiosulfat i željezni amonijev sulfat (proizvodnja sumporovodika)

Bakterije koje mogu proizvesti vodikov sulfid (bezbojni plin), uzimaju sumpor natrij tiosulfata prisutan u mediju. Jednom kada se formira H2S reagira s željezovim amonijevim sulfatom, proizvodeći željezni sulfid (crni talog je jasno vidljiv).

Proizvodnja H2S je prijavljen kao pozitivan (+) ili negativan (-).

Na slici koja je na početku članka vidi sliku cijevi C.

priprema

Izvaže se 62,5 g dehidriranog agara trostrukog šećernog šećera (TSI) i otopi se u jednoj litri destilirane vode.

Zagrijte dok se agar potpuno ne otopi. Kuhajte na minutu i često miješajući. Podijelite 4 ml medija u 13/100 epruvete s pamučnim poklopcem.

Sterilizirajte u autoklavu na 121 ° C 15 minuta. Izvadite iz autoklava i ostavite da se odmara na nagnut način. Treba paziti da podnožje i okvir imaju istu udaljenost.

Čuvati u hladnjaku 2-8 ° C. Dopustite da se učvrsti prije sadnje bakterijskog soja.

Boja dehidriranog medija je svijetlo bež, a pripremljeni medij je crveno-narančasta

Konačni pH pripremljenog medija je 7,3 ± 0,2.

aplikacije

TSI test se široko koristi na razini mikrobiološkog laboratorija. Ovaj je test bitan za usmjeravanje vrste testa koji se mora primijeniti kako bi se došlo do identifikacije roda i vrsta. Njegovo dobro izvršenje i tumačenje može uštedjeti materijal i rad.

Ako je rezultat TSI K / K i test citokrom oksidaze je pozitivan, poznato je da bi se testovi trebali koristiti za identifikaciju ne fermentirajućih Gram negativnih bacila, kao što su Pseudomonas, Alcaligen, Achromobacter, Burkholderia, među ostalim rodovima. Ako je negativna oksidaza orijentirana prema rodovima Acinetobacter, Stenotrophomonas, itd..

S druge strane, ako se dobije TSI A / A ili K / A i test citokromoksidaze je negativan, što se više nitrata reducira na nitrite, imat ćemo sigurnost da je to mikroorganizam iz obitelji Enterobacteriaceae. U ovom slučaju put identifikacije bit će usmjeren na specifične testove za ovu skupinu bakterija.

S druge strane, ako se dobije slika K / A ili A / A i test citokromoksidaze je pozitivan, dodatna ispitivanja koja će biti postavljena bit će usmjerena na identifikaciju fermentirajućih sojeva koji ne pripadaju obitelji Enterobacteriaceae, kao što su: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio i Pasteurella.

TSI s vodikovim sulfidom, negativnom oksidazom, vodit će identifikaciju sljedećih rodova obitelji Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella ili Salmonella.

TSI s oskudnim ili umjerenim sumporovodikom u alkalnoj kosini s alkalnim dnom i pozitivnom oksidazom vodit će primjenu testova za identifikaciju gram-negativnih, nefermentirajućih bacila koji proizvode H2S, kao što je Shewanella putrefaciens.

Konačno, TSI se može koristiti za istraživanje proizvodnje sumporovodika u gram-pozitivnim bacilima, osobito kada se sumnja Erysipelothrix rhusiopathiae.

zasađen

TSI medij mora biti inokuliran čistim kolonijama, izoliranim u primarnim ili selektivnim kulturama. Ako se kolonija uzme iz selektivnih medija koji su zasijani s uzorcima s miješanom florom, treba voditi računa da se uzme samo površina, budući da u donjem dijelu kolonije mogu biti održivi sojevi koji su inhibirani u tom mediju..

Stoga se petlja nikada ne smije hladiti u selektivnom mediju da bi se potom uzela kolonija i inokulirala TSI medij.

Sadnja će se obaviti ravnom petljom ili iglom. Napravit će se punkcija, vodeći računa da ona bude kroz sredinu sredine dok ne dospije do dna, a zatim se sadnja završi inokuliranjem površine cik-cak načinom. Nemojte raditi dva punkcija.

Inkubirajte na 37 ° C u aerobiozi 18-24 sata. Tumačite u ovom trenutku, ni prije ni poslije.

ograničenja

TSI test treba očitati između 18 do 24 sata inkubacije. Čitanje prije ovog vremena može dati lažno pozitivan rezultat fermentacije A / A. Dok, čitanje nakon tog vremena, može dovesti do lažne negativne slike ne-fermentora, zbog potrošnje peptona koji alkaliziraju medij.

reference

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokemijski testovi za identifikaciju bakterija od kliničkog značaja. 3. izd. Uvodnik Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka dijagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. 5. izd. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.
  4. "TSI agar." Wikipedija, slobodna enciklopedija. 10 srpnja 2018, 08:09 UTC. 10 veljača 2019, 03:33 Dostupno na: en.wikipedia.org
  5. Laboratories Britania. TSI Agar (željezni agar s trostrukim šećerom). 2015. Dostupno na: britanialab.com
  6. BD Laboratories Željezni agar s trostrukim šećerom (TSI Agar). 2003. Dostupno na: bd.com