Svijetlo zeleni agar temelj, priprema i uporaba



svijetlo zeleni agar to je kruti medij kulture, s visokim stupnjem selektivnosti. Koristi se isključivo za izolaciju sojeva roda Salmonella, međutim postoje neke iznimke, kao što su vrste tajfija i paratifi koje ne rastu u ovom mediju..

Potraga za rodom Salmonella česta je u uzorcima fecesa, vode ili hrane. U tom smislu ovaj medij može biti vrlo koristan. Ovaj agar su 1925. stvorili Kristensen, Lester i Jurgens, kasnije modificirani od strane Kauffmanna.

Sastavljen je od pluripeptonas iz peptičke probave životinjskog tkiva i pankreasne digestije kazeina, također sadrži ekstrakt kvasca, natrijev klorid, laktozu, saharozu, fenol crvenu, svijetlo zelenu i agar-agar..

Karakterizira ga vrlo negostoljubiv medij za većinu bakterija, koji pogoduje rastu salmonele, no neki koliformi mogu opstati u njemu, razvijajući se slabo.

Važno je naglasiti da u ovom mediju rod roda Shigella ne raste i niti jedan Salmonella typhimurium, ili Salmonella paratyphi. Prema tome, ako se želi izolirati te mikroorganizme, trebaju se koristiti i druga sredstva, kao što je XLD agar, između ostalih..

indeks

  • 1 Temelj
    • 1.1 Jarko zeleni agar
    • 1.2 Varijante svijetlozelenog agara (BGA)
  • 2 Priprema
  • 3 Korištenja / aplikacije
  • 4 Kontrola kvalitete
  • 5 Reference

temelj

Svijetlo zeleni agar

Svaka od komponenti koja čini medij ima specifičnu funkciju koja određuje karakteristike i svojstva agara.

Pluripeptonas i ekstrakt kvasca izvor su hranjivih tvari iz kojih mikroorganizmi uzimaju dušik i minerale potrebne za njihov razvoj. Laktoza i saharoza su izvori energije za mikroorganizme koji ih mogu fermentirati.

Svijetlo zelena je inhibirajuća tvar koja sprječava razvoj Gram-pozitivnih bakterija i velikog broja Gram-negativnih mikroorganizama..

Natrijev klorid osigurava osmotsku stabilnost medija. Dok je fenolno crveno pokazatelj pH, boja postaje kad detektira proizvodnju kiselina iz fermentacije ugljikohidrata.

Ne-fermentirajuće kolonije laktoze i saharoze rastu u ovom mediju bijele boje, ružičaste ili prozirne, na crvenoj pozadini. Na primjer, bakterije iz roda Salmonella.

Dok bakterije ili saharoze koje fermentiraju laktozu mogu rasti u ovom mediju, one razvijaju zelenkasto-žute ili zelenkasto-žute kolonije na žuto-zelenoj pozadini. Na primjer, Escherichia coli i Klebsiella pneumoniae.

Varijante svijetlozelenog agara (BGA)

Postoje i druge varijante jarko zelenog agara; novobiocin zeleni agar svijetla glukoza (NBG) i novobiocin agar svijetlo zeleni glicerol laktoza (NBGL).

Novobiocin agar svijetlo zelena glukoza (NBG)

Sadrži sojin agar triptikaze, feri amonijev citrat, natrijev tiosulfat pentahidrat, fenol crveni, glukoza, svijetlozeleni, novobiocin i destilirana voda.

Služi za izolaciju kolonija Salmonella iz uzoraka stolice.

U ovom slučaju svijetlo zelena i novobiocin su inhibirajuće tvari koje sprečavaju rast gram pozitivnih bakterija i nekih Gram negativnih mikroorganizama..

Natrijev tiosulfat je izvor sumpora, a željezov citrat je izvor željeza, koji je potreban za otkrivanje proizvodnje sumporovodika kroz stvaranje crnog precipitata željeznog sulfida..

Glukoza je fermentirajući ugljikohidrat, a fenol crveni je pH indikator.

U ovom mediju kolonije salmonele razvijaju se velike s crnim središtem okruženim crvenkastim aureolom, a iza njega slijedi jasno vidljivo područje. Neki sojevi Citrobacter freundii proizvode kolonije identične Salmonella.

Zeleno zeleni novobiocin agar glicerol laktoza (NBGL)

Ovaj medij sadrži triptikaza sojin agar, feri amonijev citrat, natrijev tiosulfat, laktozu, glicerol, svijetlozeleni, novobiocin i destiliranu vodu..

Razlika ovog medija s prethodnom je u tome što se glukoza zamjenjuje laktozom, a glicerol i fenol crveni se ne koristi.

Medij se također koristi za izoliranje vrsta Salmonella, kolonije se razvijaju crnom, proizvodnjom sumporovodika.

Samo kolonije koje ne proizvode kiselinu iz glicerola ili laktoze postižu proizvodnju H2To je dovoljno, jer niski pH ometa stvaranje H2Ovo rezultira bezbojnim kolonijama za većinu vrsta Proteus i Citrobacter.

priprema

-Izvaže se 58 grama komercijalno dobivenog dehidriranog medija. Dodajte u litru dvostruko destilirane vode. Izmiješati, ostaviti nekoliko minuta i pripremiti na izvor topline dok se ne otopi u potpunosti.

-Autoklavirajte 15 minuta na 121 ° C, ne prelazite vrijeme sterilizacije.

-Neka stoje i služe još vruće u sterilnim Petri posudama. Konačni pH treba biti 6,9 ± 0,2.

-Pustiti da se skrutne i čuvati u hladnjaku do upotrebe. Prije sadnje ploče bi trebale uzeti sobnu temperaturu.

-Praškasti medij je zelen i spreman za uzimanje narančasto-smeđe ili crvenkasto-zelene boje, ovisno o pH i komercijalnoj kući. Vrlo smeđa boja ukazuje na pregrijavanje agara.

-Kada se agar učvrsti, ne preporuča se preraditi, jer se medij pogoršava.

Korištenja / aplikacije

Ovaj medij se koristi za pretraživanje sojeva roda Salmonella iz uzoraka stolice i mliječnih proizvoda, između ostalog..

Budući da se radi o prilično negostoljubivom okolišu, poželjno je posaditi obilan inokulum ako se koristi izravni uzorak. Inače, pred obogaćivanje i obogaćivanje uzoraka treba obaviti prije sadnje u ovom mediju.

Budući da se neki sojevi salmonele teško inhibiraju ili rastu, preporučljivo je pratiti ovaj medij s drugim selektivnim agarima za salmonelu.

Sve kolonije s karakterističnom salmonelom moraju biti podvrgnute biokemijskim testovima za konačnu identifikaciju.

Kontrola kvalitete

Da bi se testiralo dobro funkcioniranje svijetlozelenog agarskog medija, ATCC sojevi mogu se koristiti za promatranje razvoja istih na njemu..

Najčešći sojevi koji se koriste za kontrolu kvalitete su: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922,  Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

Prve 3 moraju dati ružičaste ili prozirne bijele kolonije na crvenoj pozadini. Salmonella s dobrim razvojem i Proteusom s rijetkim ili redovitim rastom.

Klebsiella i Escherichia se očekuju žućkasto-žute kolonije sa žutom pozadinom, au slučaju Shigella i Staphylococcus treba inhibirati.

Dehidrirani medij treba čuvati na sobnoj temperaturi, na suhom mjestu, jer je medij vrlo higroskopan.

reference

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratorij S.A. Sjajni zeleni agar. 2009
  2. Britanski laboratorij Svijetlo zeleni agar. 2015.
  3. Laboratorij BD. BD Brilliant Green Agar. 2013.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. (5. izd.). Argentina, Uredništvo Panamericana S.A..
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiološka dijagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Uvodnik