Vogel-Johnson Agar temelj, priprema i uporaba



Vogel-Johnsonov agar je čvrsti, selektivni i diferencijalni medij kulture, posebno formuliran za izolaciju Staphylococcus aureus. Ovaj medij kreirali su Vogel i Johnson 1960. godine iz modifikacije glicin-teluritnog agara koji su 1955. godine formulirali Zebovitz, Evans i Niven.

Modifikacija se sastojala u povećanju koncentracije manitola prisutnog u mediju i ugradnji pH indikatora. Sadašnja formula sastoji se od tripteina, ekstrakta kvasca, manitola, dikalijevog fosfata, litijevog klorida, glicina, fenolnog crvenog, agara, 1% otopine kalijevog telurita i vode..

Treba napomenuti da postoje i drugi načini koji su, poput Vogel-Johnsonovog agara, selektivni za izolaciju S. aureus, kao što je soljeni manitol agar i Baird Parker agar. U tom smislu, može se reći da je temelj Vogel-Johnsonovog agara smjesa između slanog manitol agara i Baird Parker agara..

U prvim kolonijama S. aureus Razlikuju se fermentacijom manitola i pretvaranjem pH indikatora u žuto. S druge strane, u drugoj S. aureus karakterizira ga reduciranje telurita u telurij i formiranje sive do crne kolonije. Oba svojstva su uočena u Vogel-Johnson agaru.

Ovaj medij, kao i njegovi kolege, koristan je za otkrivanje Staphylococcus aureus u uzorcima hrane, sanitarnim kontrolama industrijskih proizvoda iu kliničkim uzorcima.

indeks

  • 1 Temelj
    • 1.1 Doprinos hranjivih tvari
    • 1.2 Selektivna snaga
    • 1.3 Diferencijalna snaga
    • 1.4 Osmotska ravnoteža i sredstvo za učvršćivanje
  • 2 Priprema
    • 2.1 1% w / v otopine kalijevog telurita
    • 2.2 Vogel-Johnsonov bazni medij agara
  • 3 Upotrijebite
  • 4 Kontrola kvalitete
  • 5 Reference

temelj

Doprinos hranjivih tvari

Vogel-Johnsonov medij sadrži trbuščić i ekstrakt kvasca; obje supstance osiguravaju aminokiseline dugog lanca koje služe kao izvori ugljika i dušika potrebni za rast bakterija. Bakterije koje mogu rasti u ovom mediju će uzimati hranjive tvari iz tih tvari.

Selektivna snaga

Vogel-Johnson agar može inhibirati rast gram-negativnih bakterija, pa čak i nekih Gram-pozitivnih bakterija, favorizirajući razvoj koagulaza-pozitivnih stafilokoka. Inhibirajuće tvari su kalijev telurit, litijev klorid i glicin.

Diferencijalna snaga

Tvari koje čine ovaj diferencijalni medij su manitol i kalijev telurit. Manitol je ugljikohidrat, a kada je fermentiran, nastaju kiseline koje pretvaraju medije iz crvene u žute, što se događa zahvaljujući prisutnosti fenolno crvenog indikatora pH..

Dok se bezbojni telurit reducira na metalik-slobodni telurid, uzima tamnosivu do crnu boju.

Staphylococcus aureus fermentira manitol i smanjuje telurit u telurij. Zato su tipične kolonije S. aureus u ovom mediju oni su sivi ili crni okruženi žutim medijem.

Bakterije koje rastu u ovom mediju i ne smanjuju telurit ili fermentni manitol, oblikovat će prozirne kolonije okružene crvenim medijem, čak i intenzivnije od izvorne boje, zbog alkalizacije medija uporabom peptona..

S druge strane, bakterije koje smanjuju telurit, ali ne fermentiraju manitol, rastu kao sive ili crne kolonije okružene tamno crvenom bojom..

Ako se medij priprema bez dodatka kalijevog telurita, kolonije od S. aureus razvile bi se kao žute kolonije, okružene žutim medijem, kao u slanom manitolnom agaru.

Osmotska ravnoteža i sredstvo za učvršćivanje

Dikalijev fosfat održava osmotsku ravnotežu medija i podešava pH na neutralnost. 7.2. Dok agar daje čvrstu konzistenciju mediju za kulturu.

priprema

1% otopina kalijevog telurita v / v

Ova otopina nije uključena u dehidrirani medij jer se ne može sterilizirati u autoklavu. Zbog toga se priprema odvojeno i dodaje se steriliziranom mediju.

Neke komercijalne kuće prodaju gotovo 1% otopinu kalijevog telurita. Ako se želite pripremiti u laboratoriju, postupite kako slijedi:

Izvagati 1,0 g kalijevog telurita i izmjeriti 100 ml destilirane vode. Telurit kalija otopite u dijelu vode i zatim dovršite količinu vode dok ne dostignete 100 ml. Sterilizirajte otopinu metodom filtracije.

Vogel-Johnsonov osnovni medij agara

Izvaže se 60 g dehidriranog medija i otopi se u 1 litri destilirane vode. Smjesa se zagrijava do vrenja da se potpomogne potpuno otapanje. Tijekom procesa otapanja medij se često miješa.

Sterilizirajte u autoklavu na 15 kg tlaka i 121 ° C 15 minuta. Uklonite iz autoklava i ostavite da stoji dok medij ne dosegne temperaturu od približno 45 do 50 ° C. Dodati 20 ml prethodno pripremljene otopine kalijevog telurita do 1%.

Izmiješati i sipati u sterilne petrijeve zdjelice. Ostaviti da se skrutne i naručiti u plakete za kasnije skladištenje u hladnjaku do upotrebe.

Konačni pH pripremljenog medija treba biti 7,2 ± 0,2.

Prije sadnje uzorka, pričekajte da ploča uzme temperaturu okoline.

Boja pripremljenog medija je crvena.

upotreba

Iako se može koristiti za izolaciju S. aureus u bilo kojoj vrsti uzoraka, najčešće se koristi za mikrobiološku analizu farmaceutskih proizvoda, kozmetike i hrane.

Preporučuje se da je inokulum gust. Zasejavanje se može provesti trakcijom s platinastom drškom ili površinom s Drigalskim špatulom.

Ploče se inkubiraju na 35-37 ° C tijekom 24 do 48 sati u aerobiozi.

Kontrola kvalitete

Da bi se provela kontrola kvalitete Vogel-Johnsonovog medija, mogu se koristiti sljedeći kontrolni sojevi:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 ili Proteus mirabilis ATCC 43071.

Očekivani rezultat je sljedeći: za sojeve S. aureus Zadovoljavajući rast s crnim kolonijama okružen žutim medijem. u S. epidermidis pravilan rast s transparentnim ili crnim kolonijama okružen crvenim medijem.

Isto tako, za E. coli očekuje se da će postojati potpuna inhibicija i za Proteus mirabilis djelomična ili potpuna inhibicija; ako raste, to će učiniti štedljivo, a kolonije će biti crne, okružene srednje crvenom bojom.

reference

  1. BD Laboratories. VJ (Vogel i Johnson Agar). 2006. Dostupno na: bd.com
  2. Laboratories Britania. Vogel-Johnson Agar. 2015. Dostupno na: britanialab.com
  3. Laboratories Britania. Kalijev telurit. 2015. Dostupno na: britania.com
  4. Laboratorij Himedia. Vogel-Johnsonov agar medij. 2018. Dostupno na: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
  5. Vogel-Johnsonova baza agara. Priručnik za mikrobiologiju tvrtke Merck. 12. izdanje, str. 502-503. Dostupno u: Users / Team / Downloads
  6. Suradnici Wikipédie, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipédia do enciklopedijskog života,   disponível em: wikipedia.org.
  7. Venecuelanski standard Covenin 1292-89. (1989). Hrana. Izolacija i brojanje Staphylococcus aureus. Dostupno u:sencamer.gob.ve