Osnova, tehnika i uporaba May Grünwald-Giemsa



Neka mrlja Grünwald-Giemsa Pappenheim je diferencijalna tehnika bojanja koja miješa Giemsa i May Grünwald reagense. Koristi se za diferencijaciju normalnih i abnormalnih krvnih stanica u razmazu periferne krvi i koštane srži, kao i za bojenje histoloških dijelova i citoloških uzoraka..

Oba reagensa - Gemsa i May Grünwald - izvedena su iz bojanja Romanowsky tipa, tehnike temeljene na kombinaciji kiselih i bazičnih bojila.

Giemsa je poboljšala tehniku ​​stabiliziranjem smjese eozina, metilenskog plavog i njezinih derivata s glicerolom. Nasuprot tome, May Grünwald koristi eozin i metilensko plavo, koristeći metanol kao otapalo. Ova strateška kombinacija dala je izvrsne rezultate.

Iako u smislu promatranja morfologije stanica djeluje slično Giemsinim i Wrightovim bojama, ova tehnika poboljšava prethodne pomoću finog podešavanja obojenosti parazita koji uzrokuju malariju, Chagasovu bolest, leishmaniasis i trihomonijazu.

Osim toga, pokazalo se da je to vrlo korisna tehnika za citološku studiju tekućine sperme. Istaknuto je ne samo pokazivanjem morfoloških značajki sperme, već i velikom učinkovitošću leukocita, epitelnih stanica i stanica spermatogeneze..

indeks

  • 1 Temelj
    • 1.1 Raznovrsne boje
  • 2 Tehnika
    • 2.1 Materijali
    • 2.2. Koncentrirana otopina boje May Grünwald
    • 2.3 Koncentrirana boja Giemsa
    • 2.4 Priprema puferske otopine pri pH 7.2
    • 2.5. Bris krvi ili postupak bojenja koštane srži
    • 2.6 Proširena tehnika bojenja spermatozoida
    • 2.7 Važne specifikacije
  • 3 Upotreba
    • 3.1 Vaginalna citologija
    • 3.2 Uzorak spermija
  • 4 Reference

temelj

Tehnika slijedi temelje Romanovskijevih mrlja, u kojima kisele boje imaju selektivni afinitet prema staničnim osnovnim komponentama, a kisele komponente privlače osnovne boje.

Objašnjeno na drugi način, i stanične strukture i boje imaju pozitivne ili negativne električne naboje; jednaki troškovi odbijaju i privlače se različite naknade.

Na primjer, osnovne boje kao što je metilensko plavo su pozitivno nabijene i privučene su negativno nabijenim strukturama. Zato ova boja oboji jezgre bogate DNK i RNA koje imaju negativno nabijene fosfatne skupine.

Granule segmentiranih bazofila i citoplazmi mononuklearnih bijelih krvnih stanica koje sadrže RNA također su obojene.

Isto tako, kisela boja nosi negativni naboj, zbog čega se spajaju pozitivno nabijene strukture kao što su eritrociti i granule segmentiranih eozinofila. Što se tiče granula segmentiranih neutrofila, one popravljaju oboje.

Raznolikost boja

U ovoj tehnici postoji kombinacija reakcija između ortohromatskih boja i metakromatskih tvari. Ortohromati (eozin i metilensko plavo) vežu se na staničnu strukturu s kojom su povezani i daju stabilnu boju koja se ne mijenja.

S druge strane, metahromatske tvari (derivati ​​metilensko plavog azura A i azurna B) mijenjaju svoju izvornu boju nakon što se vežu za specifičnu strukturu, a mogu postojati i različite nijanse..

Naposljetku, korak koji je provela May Grünwald rješenje zahtijeva prisutnost vode, jer bez nje boja će prodrijeti u strukture, ali neće biti fiksirana. Da bi se to dogodilo, boja mora postati polarna ili ionizirana, te se na taj način može istaložiti i vezati za srodne strukture.

tehnika

materijali

- Klizanje za slajdove.

- Mostovi za bojanje.

- Rješenje May-Grünwalda.

- Giemsa mrlja.

- Destilirana voda.

Koncentrirana otopina boje May Grünwald

Moramo odmjeriti 0,25 g eozin-metilen plavog (boja prema May Grünwald) i otopiti u 100 ml metanola. Smjesa se zatim miješa 1 sat i ostavi da odstoji 24 sata. Završio je vrijeme, filtrira.

Kako bi se primijenila tehnika, May Grünwald boju treba razrijediti na sljedeći način: za 200 ml razrijeđene boje izmjeri se 30 ml koncentrirane otopine, doda se 20 ml otopine pufera i 150 ml destilirane vode na pH 7,2-7,3. , Zatim se miješa i filtrira.

Koncentrirana boja Giemsa

Odviti 0,5 g azur-eozin-metilen-plavog (boja prema Giemsi), otopiti u 50 ml metanola i staviti 50 ml glicerina u smjesu.

Za izvođenje tehnike, razrijedite 1:10 otopinom pufera i ostavite da odstoji 10 minuta. Može se filtrirati ako je potrebno.

Priprema puferske otopine pri pH 7.2

Moraju se vagati:

- 40 mg kalijevog di-hidrogen fosfata (KH2PO4).

- 151 mg di-natrijevog hidrogen fosfata 12-hidrata (Na2HPO4).

Oba spoja su otopljena u 100 ml vode.

Razmazana krv ili postupak bojenja koštane srži

Postoje dva modaliteta: klasičan i brz.

Klasični način rada

  1. Pokrijte mrlje 2 ili 3 minute s razrijeđenom otopinom May-Grünwald.
  2. Isperite s puferom destilirane vode kako biste uklonili prethodnu otopinu.
  3. Prekriti s istom otopinom za pranje i ostaviti 1 minutu. Ideja je da je prethodna boja fiksirana na strukturu i da su stanice istovremeno hidrirane.
  4. Dodajte 12 kapi razrijeđene tinkture Giemsa na puferiranu vodu i pustite da se miješaju i homogeniziraju. Ostavite stajati 15 ili 20 minuta.
  5. Isperite razmazom puferiranom destiliranom vodom i stavite je da se osuši na zraku.
  6. Usredotočite se i promatrajte u optičkom mikroskopu krvne stanice obojene pomoću 40X cilja. Ako je potrebno, može se koristiti 100X.

Brzi način rada

  1. Pokrijte razmaz s May Grünwald bojom razrijeđenom 1 minutu.
  2. Isprati s puferiranom destiliranom vodom.
  3. Poklopite s puferiranom vodom i ostavite stajati 1 minutu.
  4. Stavite razrijeđenu Giemsa boju i ostavite 5 minuta.
  5. Isperite s puferom destiliranom vodom i ostavite da se osuši na zraku.

Ovdje opisane tehnike su vodilice, ali treba uzeti u obzir da se postupci i vremena bojanja razlikuju ovisno o komercijalnoj kući koja isporučuje reagense. Preporučljivo je slijediti korake strogo naznačene u svakoj komercijalnoj kući.

Tehnika proširene boje za spermu

1. Nanesite namaz tankim slojem May Grünwald otopine 4 minute.

2. Uklonite boju i isperite destiliranom vodom.

3. Stavite sloj razrijeđenog Giemsa (1:10) u destiliranu vodu 15 minuta.

4. Uklonite boju i isperite destiliranom vodom.

5. Pustite da se osuši i promatrajte pod mikroskopom.

Važne specifikacije

Tehnika zahtijeva da reagensi i otopine za pranje imaju pH podešen na 7,2-7,3, tako da afiniteti bojila za stanične strukture ne iskrivljuju i ne mijenjaju konačnu očekivanu boju..

aplikacije

Ova tehnika se koristi u kliničkim laboratorijima za bojenje mrlja periferne krvi i koštane srži, dijelova tkiva i citologija..

U hematološkom području ova je tehnika od vitalne važnosti u proučavanju abnormalnosti stanica u smislu oblika, veličine i broja. To je vrlo vrijedan alat za dijagnosticiranje određenih bolesti, kao što su leukemija i anemija.

Osim toga, predstavlja izvanrednu korisnost kada se traže paraziti u hematološkim poljima (Plasmodium sp i Trypanosoma cruzi) ili histološki (Leishmanias sp).

Vaginalna citologija

Što se tiče vaginalne citologije, ova tehnika je posebno povoljna za promatranje Trichomonas vaginalis. Ovo je važan nalaz, budući da njegova prisutnost simulira slike karcinoma in situ koji zatim nestaju kada se parazit ukloni.

Uzorak spermija

To je idealan alat za proučavanje uzoraka sperme, jer pruža vrijedne informacije o kvaliteti sperme.

Podaci koje nudi moraju se uglavnom odnositi na broj i morfologiju, kao i na popratne stanice koje mogu biti prisutne i koje su od vitalne važnosti, kao što su stanice zametaka, leukociti i epitelne stanice..

S ovom analizom moguće je opisati abnormalnosti uočene u spermi u glavi, vratu, srednjem dijelu i glavnom komadu..

Osim toga, oni također mogu pomoći u prikazivanju slučajeva hemospermije (prisutnost crvenih krvnih stanica u spermi) i leukospermije ili piospermije (povećanje broja leukocita u spermi).

reference

  1. Costamagna S, Prado M. Validacija svježeg testa, May Grünwald-Giemsa i Gram boje i medij za kulturu za dijagnostiku Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. Dostupno u: scielo.
  2. Merck KGaA laboratorij. Svibanj Grünwald eozin metilen plavo za mikroskopiju.
  3. "Mrva May-Grünwald-Giemsa." Wikipedija, slobodna enciklopedija. 15 Nov 2018, 14:37 UTC. 8 Sij 2019, 04:29: hr.wikipedia.org
  4. Laboratorijske kemikalije za staklo Panreac. Reagensi za histološke tehnike, hematologiju i mikrobiologiju. Dostupno na: glasschemicals.com
  5. Retamales E, Manzo V. Preporuka za bojenje razmaza krvi za čitanje krvne slike. Nacionalni i referentni biomedicinski laboratorij. Institut za javno zdravlje Čilea.
  6. Sarabia L. Spermiogram prema WHO kriterijima. Program anatomije i biologije razvoja. Medicinski fakultet Sveučilište u Čileu Dostupno na: pp.centramerica.com