Negativni temelji za bojenje, tehnika, prednosti i nedostaci

negativno bojenje To je posebna metoda bojanja koja naglašava prisutnost kapsule u nekim mikroorganizmima - uglavnom Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae i Cryptococcus neoformans-, iz kliničkih uzoraka ili čistih kultura.

Izravni uzorak koji se obično koristi za nanošenje negativnog bojanja je cerebrospinalna tekućina. Ova tehnika predstavlja brzu alternativu za vjerojatnu dijagnozu meningitisa, osobito Cryptococcus neoformans.

Isto tako, ova mrlja se može primijeniti na sputum i sterilne tekućine općenito, kao i na sojeve dobivene iz mladih čistih kultura. Ova tehnika koristi nigrozin ili kinesku tintu za njegovo izvođenje; dakle, to je vrlo jednostavna i ekonomska metodologija za primjenu koja pruža informacije velike dijagnostičke vrijednosti u kratkom vremenu.

U tom smislu, svaki laboratorij može izvesti ovu boju. Naravno, laboratorij mora imati kompetentno osoblje koje je sposobno prepoznati kvasce Cryptococcus neoformans izolirani ili pupaju i razlikuju ih od leukocita i artefakata koje uzorak može predstavljati.

indeks

• 1 Temelj
• 2 Tehnika
  • 2.1 Materijali
  • 2.2 Specifikacije za uzorkovanje
  • 2.3 Izvođenje tehnike s izravnim uzorcima
  • 2.4 Izvođenje tehnike sojevima kulture
  • 2.5 Promatranje u mikroskopu
• 3 Prednosti
• 4 Nedostatak
• 5 Mrlje tkiva s tušem
• 6 Reference

temelj

Nigrosine i indijska tinta djeluju na sličan način; prema tome, bilo koja od dvije tvari može se koristiti naizmjenično.

Ova se tehnika naziva negativnim bojanjem jer djeluje suprotno od ostalih tehnika bojanja. U tome ostaje neobojena struktura koja se traži ili koju želite vidjeti; to jest, mikroorganizme.

Stoga se bojenje temelji na bojanju dna razmaza u tamnoj boji. U ovom scenariju, strukture s poklopcem bit će označene svijetlom ili bezbojnom bojom.

Općenito, kvasci su opaženi odbojni, okruženi jasnim haloom koji odgovara kapsuli. To se događa zato što su kineska tinta i nigrozin tvari koje ne mogu prodrijeti u polisaharid koji tvori kapsulu živih mikroorganizama.

Važno je napomenuti da druge strukture koje mogu biti prisutne u izravnom uzorku, kao što su leukociti ili crvene krvne stanice, ne prodiru.

Sada, ako su mikroorganizmi mrtvi, tinktura može prodrijeti u njih, na takav način da je ovo bojenje također korisno za procjenu održivosti mikroorganizama..

tehnika

materijali

nigrosine

Nigrozin duguje svoje ime crnoj boji koju ima. To je sintetička tvar koja se dobiva zagrijavanjem smjese organskih spojeva - kao što su nitrobenzin, anilin i anilin hidroklorid - koristeći katalizator (željezo ili bakar) u navedenoj reakciji..

Kineska tinta

Kineska tinta je tvar koju uglavnom koriste Azijci za pisanje, izradu umjetničkih djela i jednobojno slikanje. Vrlo je popularan u kineskoj kulturi.

Dobiva se iz tinte lignje pomiješane s ugljenim prahom, proizvodom spaljivanja malih smolastih stabala.

Također ga je moguće pripremiti iz čađe u spaljivanju ugljikovodika (biljnih ulja), zajedno s proteinskom želatinom koja mu daje odgovarajuću konzistenciju kako bi se spriječilo taloženje čestica ugljika..

Specifikacije za uzorkovanje

- Ne zahtijeva post.

- Uzorak CSF-a, sputuma ili sterilne tekućine mora sadržavati najmanje 1 ml volumena i mora se odmah prenijeti na sobnu temperaturu u laboratoriju..

- CSF i sterilne tekuće uzorke treba uzeti od strane specijaliziranog liječnika.

- Također može biti čista kultura sumnjivog soja vezanog za spomenute patogene.

Izvođenje tehnike s izravnim uzorcima

- Uzorci se moraju centrifugirati, zatim se supernatant odbacuje i talog se uzima.

- Kapi centrifugiranog materijala (sediment) i kap kineske tinte ili nigrozina stavljaju se na čistu pločicu..

- Dobro je izmiješati i pokriti pokrovom kako bi se kapljica raširila poput tankog filma bez da prelazi rubove.

- Nakon toga se preparat montira u mikroskop.

- Ako je preparat previše taman, može se razrijediti vodom.

Izvođenje tehnike sa sojevima iz kulture

- Vrlo mali dio mladog usjeva uzima se iglom za sijanje i otopi se u kapi kineske tinte prethodno stavljene na čistu pločicu.

- Pokrov se nalazi na vrhu.

- Promatran je u mikroskopu na 10X, a zatim na 40X.

Također možete otopiti dio kolonije u destiliranoj vodi, a odatle uzeti kapljicu i pomiješati s tintom. Na taj način priprema neće biti toliko gusta, da je moguće promatrati strukture u izolaciji; Ako postoje aglomeracije, neće se dobro promatrati.

Druga metodologija je sljedeća:

- Staviti kap kulture u suspenziju na jednom kraju klizača.

- Stavite kap nigrozina na isti kraj i promiješajte.

- Uz pomoć drugog slajda, produžite uzorak kao da radite hematološki razmaz.

- Osušite i promatrajte pod mikroskopom.

Promatranje u mikroskopu

Prvo se morate usredotočiti s objektivom 10X da biste imali širok pogled na polje. Nakon toga trebate pretražiti ako postoje jasni prostori; ako postoje, usredotočite se na 40X da biste vidjeli detalje.

korist

- Lako je izvršiti.

- To je ekonomska tehnika.

- Ta metoda ne zahtijeva da se razmaz učvrsti na toplinu ili kemikalije; stoga se mikroorganizmi promatraju bez izobličenja.

- Svježi pripravak ne treba sušiti, tako da ga se može odmah promatrati, brzo generirajući rezultate.

hendikep

Nakon sastavljanja, svježe pripravke treba odmah promatrati; Ako im je dopušteno da se osuše, više ih nije moguće promatrati i nove.

Tkivo se boji indijskom tintom

Još jedna funkcija koju kineska tinta može ispuniti je u patološkim laboratorijima. Ovo se primjenjuje na uzorke tkiva koji su kirurški uklonjeni kako bi se obilježile rubne točke resekcije tumora.

Označeno tkivo se poprska octenom kiselinom. Ovo djeluje kao žar i sprječava da se tinta ispusti kada se tkivo podvrgne rutinskoj obradi za pripremu biopsije.

Postupak se sastoji od kupanja tkiva u alkoholu i ksilenu, a zatim upijanja u parafinski vosak. Ova oznaka upućuje patologa na promatranje tkiva, ukazujući gdje je margina kirurške resekcije ili druge zanimljive točke.

reference

1. "Nigrosine". Wikipedija, slobodna enciklopedija. 11. srpnja 2017., 22:46 UTC. 6 sij 2019, 16:56: hr.wikipedia.org
2. "Kineska tinta". Wikipedija, slobodna enciklopedija. 1. listopada 2018., 03:08 UTC. 6 sij 2019, 18:20: hr.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J i suradnici. (2006). Radno osoblje Autonomne zajednice Extremadura. Konkretni program Volumen IV. Uvodnik MAD. Sevilla-Spain, str. 211-212.
4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006), specijalistički laboratorijski tehničar Galicijske zdravstvene službe (SERGAS). Sadržaj specifičnog sveska 2. Uvodnik MAD. Sevilla-Spain, str. 79-80.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiološka dijagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Panamericana S.A Uvodnik